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维 生 素 的 检 测 本章学习内容 ? 1 食品中的维生素 ? 2 维生素 A、D、E的检测- -HPLC ? 3维生素B的检测- -HPLC ? 4维生素C的检测-化学比色法 ? 5 微生物法检测B族维生素 1 食品中的维生素 ? 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天 然有机化合物。 ? 主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程， 需要量极小. ? 它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生 理需要，必须经常从食物中摄取。这些化合物或 其前体化合物都在天然食物中存在； 维生素的种类 醇类 胆固 醇类 酚类 酸类 维生素分析的方法 测定方法 优点 缺点 费时（ 21 天 ） 费力 生物鉴定法 不用详尽分离 （要动物饲料） 选择性高，主要用于 操作繁琐，耗时过长， 微生物法 水溶性 要有专门人员 仪 器 分 析 （ 紫外 灵敏、快速、有较好 干扰比较多 法、荧光法） 的选择性 可同时完成多种维生 现 代 高 压 液 相 色 素及其异构体的自动 谱和气相色谱 分离、检测 简便、快速、不需特 化学分析法 不稳定,容易分解 殊仪器） 2 维生素A、D、E 的测定 2 维生素A、D、E 的测定 食品安全国家标准GB 5413.9-2010 婴幼儿食品和 乳品中维生素A、D、E 的测定 1.1 试验原理 ? 试样皂化后，经石油醚萃取， ? 维生素A、E用反相色谱法分离，外标法定量； ? 维生素D用正相色谱法分离后,外标法定量。 VD 环己烷与正己烷 VA+VE+甲醇 1.2 试验方法 （1）试样处理 →称取混合均匀的固体试样约5g,50mL 45℃- 50℃的水使其溶解。 →如果含淀粉，加入1g α-淀粉酶，混合均匀后 充氮，盖上瓶塞，置于60 ℃±2 ℃培养箱内 培养30 min。 （2）皂化： 加入约100mL 维生素C的乙醇溶液，充分混匀后 加25mL KOH水溶液混匀，53℃ ±2 ℃水温加热，磁力 搅拌皂化约45 min 后，取出立刻冷却到室温。 （3）提取： →用少量的水将皂化液全部转入分液漏斗中，加 入100mL 石油醚提取，室温下振荡后静置分层。 将水相转入另500mL 分液漏斗中，按上述方法 进行第二次萃取。 →合并醚液，用水洗至近中性。 →醚液通过无水硫酸钠过滤脱水。 →滤液收入圆底烧瓶中，于旋转蒸发器上蒸至近 干（绝不允许蒸干）。残渣用石油醚定容至 10mL。 →准确移取2.0 mL 石油醚溶液 维生素A、E 准确移取7.0 mL 石油醚溶液 维生素D （4）维生素A、E 的测定 →将2.0mL石油醚提取物试管置于氮吹仪中的石油醚吹干。 →加5.0mL 甲醇，振荡溶解。 →5000 转/分钟离心10 min。 →色谱参考条件 ? 色谱柱：C18柱，250 mm ×4.6 mm，5 μm ? 流动相：甲醇。 ? 流速：1.0 mL/min。 ? 检测波长：维生素A：325 nm；维生素E：294 nm。 ? 柱温：35 ℃±1 ℃。进样量：20 μL。 VA+VE+甲醇 C18柱 VA VE （4）维生素D的测定 → 7.0 mL 石油醚溶液于氮吹仪中的石油醚吹干。 →加2.0mL 正己烷，振