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其他类型的ELISA
其他类型的ELISA;1.阻断ELISA ; (1)100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干 。
(2) 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。
(3)加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。
(4)加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干。
; (5)加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干。
(6)加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液 。
(7)用ELISA检测仪测定OD值。
试验中同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。 ;(2)抗体捕捉ELISA ; IgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验(IgM antibody capture ELISA,简称MAC-ELISA)或反向间接ELISA法是利用抗人Igm(μ链特异性)抗体包被固相载体,作为“捕捉抗体”吸附待检血清中的Igu。
? 经过洗??除去血清中IgC及其他成分,再加入特异性抗原与“捕捉”到的相应IgM抗体结合;然后加入酶标抗体和底物显色进行测定。;该方法的主要程序为:
① 用抗u链(抗IgM重链)抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜,洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。 ;(3)布ELISA ; 以对布氏杆菌抗原的检测为例,C-ELISA的主要程序为:
(1) 首先把抗布氏杆菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并经洗涤及封闭;
(2) 加被检样品并于室温下感作30分钟,然后洗5次;
(3) 加酶标记的抗布氏杆菌抗体,于室温下感作30分钟,然后洗涤5次;
(4) 加入底物液显色;
(5) 测定OD值。 ;;
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