ELISA实验技术绪论.pptx

广州医科大学 梁 雪;;;;将抗体吸附到固相载体上;生物素-亲和素生物反应放大系统 生物素易与蛋白质（如抗体等）以共价键结合。这样，结合了生物素分子的特异性抗体，与结合了酶（如：HRP）的亲和素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物（如：TMB）时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原（或抗体）分子的目的。;;固相抗体 eg. Capture antibody -- Mouse CXCL1/KC MAb (RD system) 标准品 eg. Standard--Recombinant Mouse CXCL1/KC Protein 结合物抗体 eg. Detection antibody -- Mouse CXCL1/GRO alpha /KC/CINC-1 Biotinylated Antibody 酶 eg. Streptavidin-HRP;固相载体 ;;加样 1 加样要加到孔底，但移液枪头不能接触孔底 2 不可溅出或产生气泡 3 标准品等比稀释的操作规范 洗涤 1 洗涤次数适当 2 移液枪头悬空于孔上方 3 洗涤后孔内洗液尽量弃净 比色 1 双波长法 样本OD= OD450nm-OD630nm;空白对照 例如：用PBS代替样品 阴性对照 检验试剂有效性的控制品，同时也作为判断结果的对照。 例如：用标本/抗体稀释液代替样品 阳性对照 检验试剂有效性的控制品，同时也作为判断结果的对照。 加入量应与试剂敏感度相称 在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，定量标本待检抗原。;5.实例分析;结果分析;结果分析;7.ELISA的应用;