VEGF和MVD在乳腺疾病血管生成中的意义.docVIP

　　VEGF和MVD在乳腺疾病血管生成中的意义 作者：武变荣 李积德 郭振昌 骆玉霜 沈存芳 【摘要】 目的 探讨VEGF和MVD在乳腺疾病血管生成中的意义。 方法 采用免疫组化染色法(S-P法)检测70例乳腺疾病患者（乳腺良性疾病患者28例，乳腺癌患者42例）术后标本中VEGF表达水平和MVD值。结果 乳腺癌组VEGF高表达比例和MVD值均较乳腺良性疾病组高，差异有统计学意义（Plt;0.05）；乳腺癌组VEGF表达与年龄、肿块大小、HER2相关，与腋淋巴结、临床分期、ER、PR无关，而MVD仅与肿瘤大小和HER2相关。VEGF高表达组MVD值显著高于VEGF低表达组MVD值，差异有统计学意义（Plt;0.05）。结论 联合检测VEGF和MVD对预测乳腺疾病预后有积极意义。 【关键词】 乳腺癌 VEGF MVD 免疫组化染色法 Abstract Objective To detect the value of MVD and VEGF in breast disease angiogenesis. Methods The expression of VEGF and MVD in 70 cases of breast diseases ined by immunohistochemistry staining (SP-method). Results VEGF expression and MVD value in breast cancer uch higher than benign breast disease, there or size and HER2 in breast cancer and there eters, but MVD or size and HER2. MVD valve in VEGF high expression group munohistochemistry staining 乳腺癌与所有实体肿瘤一样, 其肿瘤细胞旺盛的代谢、增殖需要充足的血液供应, 其肿瘤新生血管形成与肿瘤的发生、 发展 密切相关。促血管形成因子的表达能促进肿瘤新生血管形成, 为肿瘤的生长、浸润及转移创造条件，血管内皮生长因子（VEGF）是已知作用最强、活性最高的促血管形成因子；微血管密度（MVD）是显示肿瘤血管形成活性的重要指标。我们分别 应用 抗Ⅷ因子抗体和VEGF单克隆抗体染色免疫组化方法检测乳腺疾病患者病例中MVD和VEGF表达情况, 旨在探讨其在乳腺疾病血管生成中的作用和意义。 1 材料与方法 1.1 临床资料 收集2006年～2007年于我院外科行手术 治疗 乳腺疾病病例70例；年龄32～64岁，中位年龄47岁；其中乳腺良性疾病患者28例，经病理证实的乳腺癌患者42例；乳腺癌组中无淋巴结转移者19例, 有淋巴结转移者23例；年龄小于45岁者16例，大于45岁者26例。早期（Ⅰ-Ⅱa期）病例16例，中晚期（Ⅱb-Ⅲ期）病例26例。因Ⅳ期患者未行手术治疗，故本资料中无Ⅳ期病例。 1. 2 主要试剂 第Ⅷ因子抗体、抗VEGF单克隆抗体及SP试剂盒购自福州迈新生物有限公司。 1. 3 染色方法 采用免疫组织化学染色法（S-P法）, 将标本做常规石蜡包埋后连续切片（4μm）, 脱蜡，水化，用PBS冲洗（10min×3次）；滴加一抗（VEGF抗体和第Ⅷ因子抗体），4℃孵育过夜，PBS冲洗（10min×3次）；滴加二抗［辣根过氧化物酶（HRP）］，37℃孵育30min，PBS冲洗（10min×3次）；DAB显色，37℃孵育30min，PBS冲洗（10min×3次）；自来水冲洗，苏木精浅染，自来水冲洗反蓝，梯度酒精脱水，透明，中性树胶封固。用已知阳性切片做阳性对照，用PBS液代替一抗做阴性对照。 1. 4 判断标准　 VEGF表达以细胞质出现棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性细胞，在低倍镜(×40)下观察切片并选择阳性细胞分布较密集的区域，然后在高倍镜(×400)下计数3个“热点 (hot spot)”，细胞数按染色深浅分为4个等级：(-) lt;5% ；(+) 6%～25%；(++) 26%～50%；(+++) gt;50%。(-)和(+)为低表达；(++)和(+++)为高表达。MVD记数参照VD值、VEGF表达的比较（见表1） 表1乳腺癌组与乳腺良性疾病组MVD值、VEGF表达比较 组 别nMVD （x±S，个)VEGF低表达（例）高表达（例）乳腺癌组4256.48±14.601428乳腺良性疾病组2842.86±15.89199 表1显示，乳腺癌组MVD值比乳腺良性疾病组显著增高（Plt;0.01）;乳腺癌组VEGF高表达比例比乳腺良性疾病组高（Plt;0.01）。 2.2