不同抗原致敏树突状细胞对荷瘤大鼠经射频消融后免疫机能的影响.docVIP

　　不同抗原致敏树突状细胞对荷瘤大鼠经射频消融后免疫机能的影响 作者：文艳玲　罗葆明　智慧　冯霞　杨海云　梁碧玲 　【摘要】 目的 本研究在大鼠ethods 38 rats or ental group 1ental group 2ent and 4 days after treatment, the CD4+ T cell and CD8+ T cell etric analysis, and CD4+/CD8+ ent, For the degree of the decrease of CD8+ T cell, there prove the antitumor immunological function of the rats after RFA. Heat-shocked freeze-thraore effectively do that than un-heat-shocked freeze-thramunology 　　 　　在肿瘤治疗当中进一步激发、增强机体对肿瘤的主动免疫反应，有可能在延缓肿瘤生长、杀灭体内微小转移灶或残留癌细胞、防止肿瘤复发和转移等方面起到重要的作用 [1-2] 。树突状细胞（DCs）是目前发现的功能最强的抗原提呈细胞，具有强大的激活初始型T细胞的能力，是目前肿瘤免疫治疗的研究热点之一。本研究在荷瘤大鼠实体瘤经射频消融（RFA）治疗后应用不同抗原致敏的DC瘤苗，旨在探讨不同的DC瘤苗对荷瘤大鼠抗肿瘤免疫机能的影响。 　　1 资料与方法 　　1．1 实验动物及实体瘤模型的制备 　　1．1．1 实验动物 SD大鼠38只，体质量80~100 g，雌雄不限，购自广州中医药大学实验动物中心。 　　1．1．2 实体瘤模型的制备 将-CSF 5 ng/ml和IL-4 5 ng/ml（R＆D 公司），置于培养箱中培养，隔天进行半量换液。收集培养8 d的DC行Giemsa’s染色光镜下观察；同时收集DC进行流式细胞免疫学检测表面特异性抗原OX6、OX62和细胞因子CD86、CD80。 　　1．2．2 DC瘤苗的制备和检验 TT法淋巴细胞杀伤试验。 1．3 实验方法 　　1．3．1 治疗 10%水合氯醛腹腔注射（0．25 ml/100 g体质量）麻醉大鼠，冷循环射频治疗系统（Radionics Co． 美国）治疗实体瘤，发射功率60 Eier法，以 Log-rank test 进行组间比较，两样本均数的比较采用t检验，Plt;0．05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　骨髓来源大鼠DC培养8 d 后收集，Giemsa’s染色可见细胞形态不规则，细胞表面具有DC的特征性突起，流式细胞仪检测：经冻融抗原致敏DC其OX6+表达率为78．25％、OX62+表达率为86．36％，CD80 + 为61．52％，CD86+为69．08%。经热休克冻融抗原致敏DC其OX6+表达率为86．24％、OX62+表达率为92．17％，CD80 + 为70．16％，CD86+为86．21%。 　　混合淋巴细胞反应试验表明DC可以诱导同种异体淋巴细胞的强烈增殖，其中热休克冻融抗原致敏DC瘤苗的作用明显高于未热休克冻融抗原致敏DC（Plt;0．05）；同时，DC瘤苗能诱导有效的CTL反应，其中热休克冻融抗原致敏DC组的细胞毒作用较强，与冻融抗原致敏DC组比较差异有统计学意义（Plt;0．05）。 　　腋下接种5 d后大鼠实体瘤二维超声显示为低回声结节，边界清，长径平均约9．47 mm；治疗前各组大鼠实体瘤体积比较差异无统计学意义（Pgt;0．05）。 　　治疗前后各组大鼠外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值的变化见表1。实验组2外周血CD4+T细胞的升高较实验组1及对照组显著（Plt;0．05）；实验组1外周血CD4+T细胞的升高较对照组比稍明显，但差异无统计学意义（Pgt;0．05）；治疗后各组荷瘤大鼠外周血中CD8+T细胞均呈下降改变，其中，下降的程度为实验组2gt;实验组1gt;对照组（Plt;0．05）；CD4+/CD8+比值的变化，实验组2的升高与其他两组相比差异有统计学意义（Plt;0．05）；实验组1的升高与对照组比较差异无统计学意义（Pgt;0．05）。 　　 　　大鼠荷瘤生存期：对照组：（9．0±1．4）d，实验组1：（13．1±2．8）d，实验组2：（16．6±5．4）d。实验组2gt;实验组1gt;对照组（Plt;0．05）。 　　3 讨论 　　DCs的功能失常在肿瘤对宿主的免疫逃避中起重要作用，通过体外途径获得功能正常的DCs并应用于治疗是当前生物治疗的研究热点之一。既