不同时期大蒜中多糖组分C的含量测定.docVIP

　　不同时期大蒜中多糖组分C的含量测定 作者：余薇 王秀红 陈凤 吴基良 闵清 【摘要】 目的对不同时期的大蒜多糖组分C进行提取纯化并测定其含量。方法用无水丙酮提取的方法分离纯化大蒜多糖组分C，以苯酚-硫酸显色后用紫外分光光度计测定吸光度，测定波长486 nm。结果在4.0～10.0 μg/ml范围内，浓度与吸光度呈良好线性关系，回归方程 A=0.069 4C-0.004 9 (R=0.999 6，n＝7)。不同时期的大蒜中多糖组分C的含量：2月份的含量87.82%，4月份的含量88.52%，6月份的含量93.61%，7月份的含量94.28%，11月份的含量85.17%。结论6～7月份大蒜多糖组分C的糖含量最高。 【关键词】 大蒜多糖组分C 苯酚-硫酸法 　大蒜为百合科葱属植物生蒜Allium sativum L．的鳞茎，其性味生辛热、熟辛温，具有温中消食、化肉消谷、解毒除邪、攻冷积和杀虫的功效，作为中药使用已有几千年的 历史 。我国是世界上最大的大蒜生产国。目前，从天然产物中寻找新的药效成分已成为国际上研究的新动向，多糖的研究颇受关注。多糖是由十个以上单糖通过苷键连接而成的聚糖。它在 自然 界分布极广，在高等植物、藻类、菌类及动物体内均有存在，是自然界含量最丰富的生物聚合物。大蒜多糖是从大蒜球根中提取的活性成分，本科室通过大量的实验研究发现大蒜多糖具有保肝护肝作用［1，2］、抗病毒［3，4］、保护心肌［5］等作用。大蒜采收期为每年的6～7月份，为了更合理地开发利用，我们对不同时期大蒜中的多糖组分C进行糖含量比较分析，旨在为大蒜多糖C的药效学研究提供基础资料。 1 器材 1.1 药材市售山东产大蒜。 1.2 试剂葡萄糖标准品，上海化学试剂公司；苯酚，上海化学试剂公司；硫酸(分析纯)，上海化学试剂有限公司；95％ 乙醇；蒸馏水 。 1.3 仪器UV-754型紫外可见分光光度计(澳大利亚VARIAN公司)；TD－II台式低速自动平衡离心机(湖南星科 科学 仪器有限公司)；FA1104 电子 分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。 2 方法与结果 2.1 大蒜多糖组分C的分离纯化 新鲜大蒜去皮 → 碾成蒜泥 → 无水乙醇浸泡过夜 → 尼龙布过滤 → 沉淀用无水乙醇浸泡1 h → 尼龙布过滤 → 沉淀用无水乙醇浸泡24 h → 尼龙布过滤 → 沉淀（即脱脂蒜泥）用双蒸水溶解 → 沸水浴8 h → 冷却 → 尼龙布过滤 → 滤液中滴加4～5倍无水乙醇 → 静置72 h → 抽滤 → 滤液68 ℃水浴约8 h蒸出乙醇 → 滤液中滴加3 ～ 4倍丙酮 → 静置6 h → 抽滤 →得大蒜多糖组分C粗品。粗品Sevage法去蛋白后在55℃下干燥至恒重得大蒜多糖组分C精制品。纯化后得大蒜多糖组分C在紫外可见光谱段进行扫描，结果显示在190 nm处有多糖的特征吸收峰，而在260 nm和280 nm 处无吸收，表明大蒜多糖组分C中无蛋白质成分。见图1。 2.2 溶液的配制 2.2.1 5%苯酚溶液的配制取苯酚100 g，加铝片0.2 g和NaHCO3 0.1 g，蒸馏。收集180～182 ℃ 馏分，精密称取精制苯酚5.0 g溶解后转至100 ml容量瓶中定容，摇匀，得5%苯酚试剂。 2.2.2 标准品溶液的制备精密称取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖10.0 mg置100 ml容量瓶中，加水溶解，稀释至刻度，摇匀即得浓度为100 μg/ml的标准品溶液。 2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取55 ℃下干燥至恒重的大蒜多糖组分C 5.0 mg，置100 ml容量瓶中，加双蒸水溶解，稀释至刻度，摇匀即得多糖供试品溶液50 μg/ml。 2.3 检测波长的选择 精确量取的葡萄糖溶液、样品溶液1.0 ml分置于两支干燥试管中，分别加入5%苯酚溶液1.0 ml摇匀，然后加入浓H2SO4 5.0 ml摇匀，另以1.0 ml水同上操作，作为空白液，于室温中放置5 min，沸水浴中恒温15 min，取出，冰水浴冷却至室温，在波长400～800 nm之间扫描。结果供试品与标准品溶液在486 nm波长处均有最大吸收，而空白溶液在此波长无干扰，故选用486 nm 为检测波长。 见图2～3。 2.4 标准曲线的测定 精密量取标准品溶液0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 ml，分别置7只试管中，各加蒸馏水至1.0 ml，再加5％苯酚溶液1.0 ml，摇匀后再加入浓H2SO4 5.0 ml，摇匀，室温下放置5 min，沸水浴中恒温15 min，取出，冰水浴冷却至室温，在486 nm处，以蒸馏水管作为空白对照，测定各浓度标准液的吸光度，以糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线， 计算 得回归方程A=0