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1．培养基的配制 原理/link?url=B2SX0TUS5KB2ovXQcKyds9MS9OnW7y5Yn204CH3vg44FsTWICJAnwePCb013a9T-vzmX5g9oCbv6GSuPahN6jfA9hVhQXCd3QCMZ_NTscu7 步骤 LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，然而根据其发明人贝尔塔尼(Giuseppe Bertani)的说法，这个名字来源于英语的 lysogeny broth，即溶菌肉汤。 LB培养基的配制： 成分 胰蛋白胨(tryptone) 10g 酵母提取物(yeast extract) 5g 氯化钠(NaCl) 10g 固体培养基另加 琼脂粉 15-20g 加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min 配制方法 　　（1）称量 分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。 　　（2）溶化 加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。 　　（3）调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。 　　（4）定容 将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。 　　（5）加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 　　（6）分装、加塞、包扎。 　　（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。 2、大肠杆菌菌种活化 原理 　　菌种的活化就是将处于保藏状态的菌种放入合适的培养基中进行培养，逐级增大培养是为了得到纯而壮的培养物，可以理解为就是为了获得活力旺盛的、接种数量足够的培养物进行培养。菌种发酵一般情况下需要2-3代的复壮过程，因为保存时的条件往往和培养时的条件不相同，所以要活化,让菌种逐渐适应培养环境 　　中药标准对照品研究中心建议实验要明白菌种活化的情况就首选需要了解菌种保藏的方式和方法。目前国际和国内常用的菌种保存方法包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80℃ 冰箱冻结法、液氮超低温冻结法。 　　对于不同的保存方式活化的方式也不同： 　　1 定期移植法的菌种复苏较简单，直接转接即可； 　　2 液体石蜡法保存的菌种在复苏时，挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后，再重新转接一次； 　　3 沙土管法保存菌种在复苏时，在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中，增殖培养后再转接斜面； 　　4 真空冷冻干燥法保存菌种在复苏时先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热， 用无菌棉签沾冷水，在顶部擦一圈，顶部出现裂纹，用挫刀或镊子颈部轻叩一下，敲下已开裂的安瓿管的顶端，用无菌水或培养液溶解菌块，使用无菌吸管移入新鲜培养基上，进行适温培养； 　　5 -80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏时，从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38℃-40℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养 　　6 液氮超低温冻结法保存菌种复苏与-80℃ 冰箱冻结法保存菌种复苏相似，从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。 步骤 　　总结一下菌种活化需要以下几个步骤： 　　第一配置菌种适宜生长的培养基 　　第二将菌种从保藏状态恢复到室温状态，比如将冷冻的菌种解冻 　　第三将通过操作将保藏的菌种接种到培养基中培养，此步骤称为菌种复壮 　　第四步挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2-3次，从而得到生长良好的菌落经过这四个步骤就到达将菌种从保藏状态活化的最终目的. 　　举例大肠杆菌菌种活化方法：配活化培养基（LB）： 活化大肠杆菌配方：0.5g酵母粉，1g蛋白胨，1g氯化钠，稀释到100ml复苏细胞（去掉DMSO及冷冻过程中产生的有毒物质） 　　材料：液氮中的细胞共1毫升：含20%血清（FBS），10%DMSO（防止细胞内产生冰晶），培养基 　　步骤：一、从液氮（约-190度）中取出细胞（管中有1ml细胞）（稍微抖掉液体）二、快速放入37度水浴1分钟。三、加入1ml DMEM 培养基融化冰晶。四、全部移入离心