人脑胶质瘤特异抗原肽白介素.docVIP

　　人脑胶质瘤特异抗原肽白介素 【摘要】 目的:构建白介素-13α2受体(IL-13Rα2)重组表达质粒，为检测IL-13Rα2抗原肽的表达奠定实验基础。 方法 :利用RT-PCR法从U251胶质瘤细胞株中获得IL-13Rα2目的基因，并与克隆质粒pMD19 Simple T载体连接转入DH5α菌克隆，用Xho I和Hind III将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒pET-28a连接，转入BL21(DE3)菌，提取重组质粒进行酶切及测序鉴定。结果:目的基因IL-13Rα2与表达质粒pET-28a连接，成功构建pET-28a-IL-13Rα2重组质粒。结论:IL-13Rα2目的基因能经RT-PCR法获得，并能成功与表达质粒连接，构建pET-28a-IL-13Rα2重组质粒，为今后检测IL-13Rα2抗原肽的表达以及利用其来免疫 治疗 胶质瘤提供了良好的实验基础及 理论 依据。 【关键词】 胶质瘤 白细胞介素13 受体 质粒 Abstract: Objective: To construct rebinant expression plasmid pET-28a-IL-13Rα2 that contribute to the expression of IL-13Rα2 antigen. Methods: Obtain The objective gene IL-13Rα2 from U251 glioma cell line id pMD19 Simple T vector and transfer to DH5α.Digest the IL-13Rα2 from rebinant cloning plasmid using Xho I and Hind III, then connect to the expression plasmid pET-28a that e enzymes，and convert to the BL21(DE3).At last, extract the rebinant plasmid and identify it using PCR digestion and sequencing. Results: The rebinant expression plasmid pET-28a-IL-13Rα2 U251 glioma cell line using RT-PCR and connect to the expression plasmid pET-28a succeed. The construction of pET-28a-IL-13Rα2 has a great conctribution not only to the expression of IL-13Rα2 antigen, but also to the immunotherapy of glioma. Key a; IL-13; receptor; expression plasmid 近年来，随着对分子生物学及免疫治疗认识的不断提高，胶质瘤的免疫治疗不断得到重视，而IL-13Rα2作为脑胶质瘤的特异抗原肽，可由树突状细胞递呈抗原信息，激活细胞毒性T淋巴细胞来杀伤肿瘤细胞[1,2]。本 研究 旨在构建IL-13Rα2的表达质粒，为今后进一步检测IL-13Rα2抗原肽的表达及进行免疫治疗研究奠定实验基础。 1 材料和方法 1.1 主要试剂与细胞株 Trizol试剂（购自美国Invitrogen公司），Fermentas First Strand cDNA Synthesis Kit(购自MBI公司)，U251胶质瘤细胞株（购自中科院上海生物细胞研究所)，DMEM高糖培养基（购自上海生工），Ex Taq酶、Hind Ⅲ内切酶、Xho I内切酶、T4 DNA Ligase、X-Gal、IPTG、pMD19Simple T载体、DH5α菌（均购自大连宝生物公司），胶回收试剂盒、质粒小抽试剂盒（购自BBI公司），pET-28a表达质粒（购自上海捷瑞公司），BL21菌为本实验室保存。 1.2 主要仪器 细胞培养箱（HARRIS USA），超净工作台（Telstar Bio-Ⅱ-A），倒置显微镜（LEiCA DMIL），PCR仪（Thermo Hgbaid），高速离心机（Saitexiangyi TDZ5-EM培养基（含10%胎牛血清、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素）的六孔培养板中，37 ℃、5% CO2条件下进行培养，3 d传代一次。 1.3.2 RT-PCR获得IL-13Rα2目的基因：Trizol一步法从培养的胶质瘤细胞中提取总RNA，Fermentas逆转录初始链cDNA