管碟法测定抗生素效价综述.ppt

双碟的培养： 根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平叠放的双碟数以不超过三层为宜。 抑菌圈的测量： 将培养好的双碟取出，打开陶瓦盖，将钢管倒入1：1000新洁尔灭溶液或其他消毒液内浸泡，检查抑菌圈是否圆整，如有破圈或不圆整圈应将碟弃去，切忌主观挑选抑菌圈和双碟，是结果造成偏离。 抑菌圈测量仪的使用：每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。 结果的可靠性检验及效价测定： 抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。 记录与计算 　1. 试验记录 应包括抗生素的品种、剂型、标示量、生产厂、批号、检查目的、检验依据、检验日期、温度、湿度，标准品与供试品的称量、稀释步骤与核对人，抑菌圈测量结果。当用游标卡尺测量抑菌圈直径时，应将测试数据以框图方式顺双碟数记录。当用测量仪测量面积或直径时，应将电脑测试、计算、统计分析的打印纸贴附于记录中。 　2. 计算注意事项：a、浓度比不等于1.000时，如标准品溶液（S）d的浓度为1005u/ml,而供试品溶液(T)的浓度995u/ml，D=S/T=1.0101；也可将D值设为1.000，而估计效价设为101.01% b、所测定的实际效价应在D值与估计效价乘积的90%和110%范围内，超出就应重新估计效价。如估计效价为100%，D=1.000，而测得的效价为115%，按110%重估效价再进行试验。 C、原料及不合格供试品，进行平行试验，配置两份标准品和两份供试品，一份标准品与一份供试品为一组滴样 结果判断 　1.　可靠性测验结果认为可靠，方可进行效价和可信限率计算。 　2.可信限率　考核实验的精密度，除药典各论另有规定外，本法的可信限率不得超过5%。上述各项规定都能符合者，试验结果成立。 　3. 实验计算　所得效价低于估计效价的90%或高于估计效价的110%，则检验结果仅作为初试，应调整供试品估计效价，予以重试。 　4. 效价测定　一般需双份样品，平行实验以便核对。对不符合规定的样品应至少有2次符合规定的结果，才能发出报告。 克服常见的一些影响因素 1. 实验器材的准备 1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象 1.2 实验器材的清洗 抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素（庆大霉素、争光霉素、链霉素等）或者被清洗用的杀菌剂（如新洁而灭、洗洁精等）污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。160℃干热灭菌2h后备用。 2. 配制试验所需的样品、标准品、缓冲液与培养基 2.1 样品与标准品溶液的配制 标准品与样品从冰箱取后，使与室温平衡。称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平，样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥剂应保持经常注意更换。称量结束后，加入磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。稀释时，都应采用容量瓶，每一步稀释取样量不得少于2mL。用刻度吸管吸取溶液前，要用待稀释液冲洗吸管2～3次，吸取溶液后，要用滤纸把刻度吸管外壁多余液体擦去，再从起始刻度开始放溶液。在称量抗生素样品过程中，操作者的工作服上有可能会沾染抗生素粉末，在配培养基、加底层培养基、加菌层培养基或滴加抗生素溶液时，会随衣袖的抖动落入培养基，造成破圈或者无抑菌圈。所以配制抗生素溶液应单独使用一套工作服。 2.2 培养基与缓冲液的配制 配制培养基与缓冲液时要按照配比用量，配制后调节其pH值。因为在pH值、盐浓度的影响下，即使琼脂培养基上的两个相邻的小管距离足够，还是可能会出现卵圆形抑菌圈。例如四环素易受pH值影响，链霉素易受盐浓度影响。培养基可以购买厂家生产的产品，因为大批量产品中的成分配比较稳定，可比性较强。 3. 加注培养基 3.1 加注底层培养基 无菌室工作台面可能因为使用时间已久，变得凹凸不平或者倾斜，会影响培养基菌层的厚度均匀性。菌层越薄，形成的抑菌圈越大，会给试验造成很大的误差。我们可以在桌面上放置一块足够大的玻璃平板，保证双碟放置区域的平整。试验中加注的培养基如果温度太低，就容易在内部结块，或者加注到双碟之后不能及