2-2大肠杆菌.pptVIP

微生物的培养和利用 第二节 大肠杆菌的培养和分离实验 * 思考？ 1.培养大肠杆菌需要配制培养基，培养基中应该添加哪些营养成分？培养基如何灭菌？ 2.若大肠杆菌和其他微生物混杂在一起，如何获得大肠杆菌纯种？获得纯种后如何保存？ 3.如何处理大肠杆菌便于在显微镜下观察？ * 实验主要原理 1.培养大肠杆菌的原理： 大肠杆菌的代谢类型为异养、兼性厌氧型，培养基中应加入有机碳源、氮源、水和无机盐。培养时应提供有氧环境。 牛肉膏蛋白胨培养基配方： 牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，（20g琼脂）加水定容至1000mL * 2.平板划线法分离大肠杆菌的原理 用接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐渐稀释分散到培养基的表面。经多次划线后，可以分离由一个细胞繁殖而来的单菌落 * 此法可将细菌分为两大类： 不被脱色而保持蓝紫色者为 革兰氏阳性菌（G+）； 被脱色后又被染上红色者为 革兰氏阴性菌（G-）。 大肠杆菌(革兰氏阴性菌) 金黄葡萄球菌(革兰氏阳性菌) 细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染（以增加染料与细胞的亲和力）后，用酒精或丙酮脱色，再用番红复染。 3.革兰氏染色，使大肠杆菌便于观察的原理 * 实验目的 1.配制牛肉膏蛋白胨固体、液体培养基，进行高压蒸汽灭菌 2.掌握倒平板技术。 3.利用液体培养基进行大肠杆菌的扩增。4.用平板划线法在固体培养基上进行接种 5.培养微生物并观察大肠杆菌的单菌落 6.显微镜下观察大肠杆菌的形态 7.利用斜面培养基和划线获得的单菌落进行纯培养。 * 斜面大肠杆菌菌种 * 实验流程 LB液体 LB固体50ml 培养基配 制和灭菌 用于大肠杆菌扩增 扩大培养（代替斜面菌种） 倒平板，大肠杆菌划线培养 获得单菌落（纯种分离） 100mL 5mL 挑取单菌落或液体培养基，制片，显微镜下观察大肠杆菌 * 1.培养基的配制和灭菌 称量 溶化 称量→溶化→调pH →分装→高压蒸汽灭菌→搁斜面 * 分装 加棉塞 * 包扎 * 高压蒸汽灭菌 * * 搁置斜面 * 2.无菌操作倒平板 3.平板划线法接种 * 4.37℃恒温箱中倒置培养12~24h 倒置培养的原因： 培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，并凝结成水滴留在培养皿的盖上；水蒸气形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。 * * 5.利用液体培养基扩大 培养大肠杆菌 摇床上震荡培养 目的： 6.显微镜下观察染色后 的大肠杆菌 增加溶氧 使菌体和培养液充分接触 * 实验结果观察和分析 1.观察平板划线法获得的单菌落 * * 请分析没有出现单菌落的可能原因？ 菌液浓度大 划线次数少 培养时间长 * 2.观察液体培养基的浑浊度 空白培养基 生长细菌的培养基 * 3.显微镜下观察经革兰氏染色的大肠杆菌 * 1.平板划线法 分离微生物纯种的方法 2.液体稀释涂布法 * 1.实验结束后，用过的细菌培养基等如何处理？ 思考与讨论 加热灭菌后废弃，不能直接倾倒到无机环境中，防止 细菌 污染 2.如何保存菌种？ 在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再划线接种在 空白 斜面上，37℃培养24h后，4℃冰箱保存。 3.未接种的培养基表面有菌落出现，说明什么问题？ 培养基灭菌不彻底 4.在培养后如何判断是否有杂菌污染？ 如出现不同形态、颜色、粘稠度的菌落可能被污染 * *