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2006年生物化学 举5例说明绿色荧光蛋白在生物化学研究中的应用 1活细胞内基因表达与蛋白质-蛋白质相互作用的光学成像与可视化（基于GFP的荧光共振能量转移，信号传导过程） 2小动物体内恶性肿瘤生长过程及药物作用效果的实时光学成像检查，（荧光探针，找出与已知蛋白的配体分子及药物。 3制备融合抗体，具有免疫原性和发射荧光两种特性。 4构建分子感受器的有力工具，这种GFP感受器能被用来检测多种分子GFP 的示踪特性，研究肿瘤细胞内某些基因异常表达与肿瘤细胞浸润的关系，即可揭示肿瘤细胞浸润的某些机制。 某一蛋白样品在SDS上经靠马斯亮蓝染色呈现单一的条带。是否可以认为此蛋白样品只包含一种蛋白？如何进一步鉴定这个蛋白的纯度 不能认为是单一蛋白，SDS上仅仅代表的是分子大小一直的条带，可以进行双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和SDS的组合，蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：等电点沉淀法样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。用抗体将相应特定分子沉淀的同时，与该分子特异性结合的其他分子也会被带着一起沉淀出来的技术。这种技术常用于验证蛋白质之间相互特异性结合。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法肿瘤细胞在生长过程中，经过许多代分裂繁殖产生的子细胞，呈现不同的基因改变或其他大分子的改变 请详细说明真核生物基因表达在不同水平上的调节机制 中国科学家2005年在生命科学研究领域获得了大丰收，在CELL、Science、Nature上发表了多篇原创性文章。请说出其中两篇的主要内容和主要作者或主要作者单位。 2007年生物化学 名词解释 Alternative Splicing Nonsense mediated decay RNA editing mircoRNA small interfering RNA（siRNA） 简述真核生物中分泌型蛋白的转运途径级主要的生理功能 请说明真核生物中转座子的两大类型、各自的转座方式及生物学意义 转座元件是基因组中可移动的DNA分子Dna转座子是一段能直接在基因组上移动的DNA序列,它的转座不会引起宿主基因组的增大反转录转座子不同于转座子,是以DNA-RNA-DNA的途径来实现转座,在整合酶的作用下新生成的DNA状态的反转录转座子整合到宿主基因组中.这样,反转录转座子在宿主基因组中的拷贝数得到不断积累,从而使基因组增大.根据是否具有编码反转录酶的能力,反转录转座子又分为长末端重复序列(LTR)反转录转座子和非LTR反转录转座子两个亚类,而DNA转座子分为自主元件、非自主元件和微型反向重复转座元件(MITE)三种类型目前转座子元件是植物分子生物学操作和植物基因工程中分离克隆基因和研究基因功能最有力的工具之一，其中的一大类—反转录转座子具有分布广、异源转座高和受组织培养诱导激活等优势，因此它的发现和利用又为转座子标签的应用提供了更广阔的前景。不了解基因产物的生化性质和表达模式的情况下，分离克隆植物基因，即转座子标签(transposon tagging)，此外通过对现有转座元件的改造以及转座元件作为载体改造的工具，也将大大加速植物基因和功能序列的分离与研究，如利用转座子元件构建启动子捕捉载体，效率比T-DNA标签高 免疫共沉淀优点 　　（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； 　　（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响； （3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。免疫共沉淀缺点 　　（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用； 　　（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； （3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。 作用信号是在融合基因表达后， 在细胞内重建转录因子的作用而给出的， 省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。 检测在活细胞内进行， 可以在一定程度上代表细胞内的真实情况。 检测的结果可