第十章氨基酸药物完整.ppt

2006 年，进口赖氨酸的平均价格为13.30 元每kg； 2007 年，国内进口赖氨酸的均价约14.30 ，同比上涨了约6.7%；国产赖氨酸均价14.40 元，同比上涨约10%。 二 性质 L-赖氨酸，无色晶体，熔点224.5℃（分解）。易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚。目前大规模制备赖氨酸是采用发酵法。 游离的L-赖氨酸极易潮解，因具有游离氨基而易发黄变质，并有刺激腥味，难于长期保存。 L-赖氨酸盐酸盐则比较稳定，不易潮解，便于保存。 三、合成 赖基酸依微生物的种类而异。细菌的赖氨酸生物合成途径需要经过二氨基庚二酸(DAP)合成赖氨酸 根据赖氨酸的生物合成途径．由葡萄糖生成赖氨酸的化学反应式为： 赖氨酸对糖的理论转化率为： 赖氨酸产品一般以赖氨酸盐酸盐形式存在。因此，赖氨酸盐酸盐对糖的理论转化率为： 四 赖氨酸的发酵生产 赖氨酸发酵生产有两种类型，直接发酵法和两步发酵法。 直接发酵法工艺：黄色短杆菌，谷氨酸棒状杆菌 两步发酵法：大肠杆菌氨基酸营养缺陷型菌株 （一）L-赖氨酸生产菌种及扩大培养 1．生产菌种 2、种子培养：二级或三级 斜面种子培养这组成：牛肉膏1％，蛋白陈1％，NaCl0．5％，葡萄糖0．5％，琼脂2％，PH—7．0-7．2。在30℃保温24h。 一级种子培养基组成：葡萄糖2．0％、 硫酸铵 0．4％．磷酸氢二钾0.1％，玉米浆1％一2％，豆饼水解液1％-2％，MgS040．04％一o．o 5％，尿素0．1％，pH＝7．0一7．2，接种量约为5％一10％。 培养条件：30一32振荡培养15—16h，转速100一120r／min。 二级培养：见书中 （二）赖氨酸发酵工艺及控制要点 赖氨酸发酵过程分为两个阶段，发酵前期(约0-12h)为菌体生长期和产酸期。 (1)温度 赖氨酸发酵，前期控制温度32℃，后期30℃。 (2)pH值控制 发酵最适PH值为6．5-7．0。控制范围在pH＝6．5-7 ．5整个发酵过程保持pH值平稳。 (3)种龄和接种量 (4)供氧 供氧不足，细菌呼吸受抑制，赖氨酸产量降低. (5)生物素 (6)硫酸铵 硫酸铵在无其他铵离子情况下，硫酸铵用量为4．o％一4．5 ％时，赖氨酸产量最高。 五 赖氨酸的酶法生产 酶法转化 1．酶法转化的方法 ①将含有D—氨基己内酰胺消旋酶的无色杆菌与含L-氨基己内酰胺水解酶的隐球酵母混合培养，使DL—氨基己内酰胺DL-Amino-omega-caprolactam直接转化，全部生成L—赖氦酸。 ②利用D-氨基己内酰胺消旋酶，将D-氨基己内酰胺消旋化，生成L—氨基己内酰胺，再利用L—氨基己内酰胺水解酶将L-氨基己内酰胺水解，生成L-赖氨酸。 2．酶法反应工艺 反应实例：10％、100mL(780m mol)的DL—氨基己内酰胺(用HCl调pH＝8． 0)，加入0．1g隐球酵母的丙酮干燥菌体及0 ．1g无色杆菌的冷冻干燥菌体，置于300mL的三角瓶中，在往复式摇瓶机上进行振荡培养，温度保持40，反应时间为24h。上情液中测不出D-氨基己内酰胺。加人少量活性炭，搅拌并煮沸3min，冷却至室温，过滤后用盐酸调pH＝4．1，真空浓缩，60℃干燥，得到L—赖氨酸盐酸盐，纯度为99．5％。 酶法拆分 酶水解后生成的L-赖氨酸不溶于有机溶剂，而N-乙酰-D-赖氨酸则能溶解。故加入有机溶剂，L—赖氨酸即析出。常用的有机溶剂为乙醇、醋酸乙酯或磷酸三丁酯。母液中的乙酰—D—赖氨酸经真空浓缩至干，在用6molHCl水解即得D-赖氨酸盐酸盐。 六提取和精制 1发酵液 由以下四部分组成 (I) 氨基酸 (2)菌体 (3)培养基残留物 (4)色素 2 提取 从发酵液中提取赖氨酸通常有四种方法：①沉淀法，利用赖氨酸生成难溶性盐沉淀分离，或使赖氨酸结晶析出，②有机溶剂抽提法；③离子交换树脂吸附法；④电渗析法。 强酸型树脂和弱酸型树脂 3离子交换法提取赖氨酸 1）上柱吸附 2）洗脱 氨水、氨水+氯化铵、氢氧化钠 用茚三酮检验流出液，当有赖氨酸流出时可以收集。 4浓缩 1）．浓缩与除氨 经过离子交换提取的赖氨酸洗脱液，体积较大，赖氨酸含量较低，约为60-80g／L，还含有较多的氨．约为10-15g/L，因此需要进行浓缩和除氨。 温度70℃以下，真空度0．08MPa左右 2）．赖氨酸盐酸盆的结晶与分离 赖氨酸盐酸盐浓缩液放入搅拌罐中，搅拌结晶16—20h，为使晶体不太细，结晶过程应控制温度，最好在5℃左右结晶完毕停止搅拌，用离心机分离，用少量水洗晶体表面附着的母液。母液经浓缩，结晶，再结晶，直至不能析出结晶时，将母液稀释，上离子交换柱吸附回收赖氦酸。所得的品体为粗晶体。 3）．赖氨酸盐酸盐的重结晶与干燥 结晶析出的赖氨