凝胶渗透色谱净化气相色谱测定中成药中有机氯农药的残留量.docVIP

　　凝胶渗透色谱净化气相色谱测定中成药中有机氯农药的残留量 作者：夏品华 张明时 陈文生 伍庆 【摘要】 目的建立凝胶渗透色谱（GPC）净化-毛细管气相色谱测定中成药中有机氯农药残留量的方法。方法凝胶渗透色谱采用的流动相为丙酮-环己烷 (1∶4)，最佳流速是5 ml/min，最佳馏分收集时间是15～26 min。结果低、中、高3个添加水平的回收率分别为85.5%～115.0%，84.3%～123.4%，86.7%～114.0%，相对标准偏差（RSD）为0.1%～9.3%，检出限0.008～0.05μg/kg。结论该方法简便，分离效果好，灵敏度高，重现性好。 【关键词】 气相色谱 凝胶渗透色谱 有机氯农药 中成药 残留量 有机氯类农药(OCPs)是一类高效广谱杀虫剂，广泛应用于杀灭农业害虫，曾是各国杀虫剂中使用最广泛的一大类。这类农药化学性质稳定，脂溶性强，残效期长，易在脂肪体内蓄积，造成慢性中毒，严重危及人体健康，中药材及中成药的农药残留问题近年来逐渐引起人们的重视。尽快建立中药中农药残留的检测方法及限量标准，对保证人们用药安全具有积极的意义。目前中药材中有机氯农药残留测定主要采用有机溶剂提取，浓硫酸净化，气相色谱分析。但因中药成分复杂，其中农药残留量属痕量范畴，这样使得农药的提取、分离、净化与富集的难度加大。凝胶渗透色谱作为一种自动化的分离技术在农药残留分析中得到了推广和应用［1～7］。本研究运用凝胶渗透色谱替代硫酸净化，有效地克服了硫酸净化回收率偏低的难题，建立的毛细管气相色谱分析方法，具有操作简便、分析速度快、分离效能高、检测灵敏度高等优点，适合于中成药中痕量有机氯农药的测定。 1 材料 Agilent 6890N 气相色谱仪，配备捕获检测器（μ-ECD），安捷伦GC工作站。GPC纯化系统：泵（p ），二极管阵列检测器（mID×300 mm），数据处理软件（pol定量环。OV-1701毛细管色谱柱30 m×0.32 mmID×0.32 μm；R210旋转蒸发仪（瑞士BUCHI）； 电子 分析天平（R200D）。 丙酮、环己烷均为色谱纯（天津科密欧），二氯甲烷为分析纯（天津科密欧）。农药标准品：甲体-六六六（α- BHC）；乙体-六六六（β- BHC）；丙体-六六六（γ- BHC）；丁体-六六六（δ- BHC）；对对位滴滴依（PP`-DDE）；邻对位滴滴涕（OP-DDT）；对对位滴滴滴（PP`-DDD）；对对位滴滴涕（PP`-DDT）；五氯硝基苯（PB）。所用标准品由 中国 成都化学试剂生产，纯度大于99%。用甲醇分别配成0.1 mg/ml的单标储备液，再分别移取一定量的单标储备液于10 ml容量瓶中，用丙酮-环己烷（1∶4）混合液定容，配成混合标准液。 2 方法 2.1 样品的提取 准确称取仙灵骨葆胶囊样品（胶囊直接取其粉末即可，颗粒须经磨碎成粉末） 2.5 g于具塞锥形瓶中，加入10 ml水浸泡过夜或超声30 min，加丙酮30 ml超声30 min，加3 g氯化钠，振摇，再加30 ml二氯甲烷，超声30 min，静置1～2 h，取30 min上清液于100 ml浓缩瓶中，在50℃旋转蒸发浓缩近干，再加丙酮-环己烷（1∶4）混合液5 ml，重复2次，用丙酮－环己烷混合液定容至10 ml，4 000 r/min离心10 min待用。 2.2 GPC凝胶净化实验 2.2.1 GPC洗脱 规律 实验取5 ml一定浓度的农药混合标准液进样，用l/ min，每毫升收集于一个试管中，收集30个，用氮吹近干，丙酮－环己烷定容至1 ml得到待测液1。同样在做成药洗脱曲线时，用带0.45 μl尼龙微孔滤膜的10 ml的注射器取样品提取液5 ml过GPC，其余同上，得到待测液2。 2.2.2 GPC净化取“2.1”项的提取液5.0 ml进样到GPC；保持流速为5 ml/ min，收集第15～26 min馏分。浓缩淋洗液,用丙酮－环己烷定容至5 ml待测，得到待测液3。 2.3 GC分析条件Agilent 6890N 气相色谱仪，配备捕获检测器（μ-ECD），ov-1701弹性石英毛细管色谱柱30 m×0.32 mmID×0.32 μm；进样口280℃，柱温220℃，检测器370℃，载气为高纯N2（纯度99.99%），柱前压105 KPa，柱流量1.5 ml/min，进样量1 μl，不分流进样。 3 结果 3.1 净化条件的确定馏分收集时间点的确定要充分考虑被渗透排除的机体组分与混合标准组分的分离情况和回收率。成药样品和农药混合标准经GPC净化后GC-ECD检测结果表明，收集第15～26 min的馏分，成药（仙灵骨葆胶囊，贵州同济堂制药有限责任公司生产）样品净化率可达70%，加标回收率