凝胶色谱法测定注射用盐酸头孢吡肟中的高分子杂质.docVIP

　　凝胶色谱法测定注射用盐酸头孢吡肟中的高分子杂质 【摘要】 目的 建立测定注射用盐酸头孢吡肟中高分子杂质(头孢吡肟聚合物)的 方法 。方法 采用分子排阻凝胶色谱自身对照外标法进行定量，用葡聚糖凝胶G10(40～120 μm)为填料，流动相A为0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.0)，流动相B为超纯水，流速为1.0 mL/min, 检测波长为254 nm。结果 注射用盐酸头孢吡肟的高分子杂质含量均小于0.5％。结论 本法快速、简便，可用于注射用盐酸头孢吡肟高分子杂质的质量控制。 【关键词】 盐酸头孢吡肟 凝胶色谱法 高分子杂质 　　Abstract:Objective To establish a method for determining high molecular purities in cefepime hydrochloride injection. Methods Quantification of high molecular purities in cefepime hydrochloride injection ined by Sephadex G10 column chromatography ethod. The mobile phase consisted of 0.1 mol／L phosphate buffer(pH7.0) and supper pure L／min and detection . Results The content of high molecular purities in different batches of cefepime hydrochloride injection ethod ining high molecular purities in cefepime hydrochloride injection. 　　Key e hydrochloride; sephadex G-10; high molecular purities 　　注射用盐酸头孢吡肟（cefepime hydrochloride）是20世纪90年代上市的第四代头孢菌素，本品抗菌谱广，药效强。实验 研究 表明，控制产品中高分子杂质是减少β-内酰胺类抗生素过敏反应的重要途径之一 ［1］。《 中国 药典》2005年版采用凝胶色谱自身对照外标法定量测定β内酰胺类抗生素中的聚合物，而盐酸头孢吡肟不能完全缔合，无法采用“自身”对照外标法定量，根据《中国药典》2005年版二部阿莫西林聚合物检验方法，可以用结构与研制产品类似，且能够完全缔合的其他药物制备对照品，进行自身对照外标法定量［2-3］。本文用与头孢吡肟结构及分子量相近的头孢噻肟作对照品，建立了测定注射用盐酸头孢吡肟中高分子杂质(头孢吡肟聚合物)的方法。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　DHLA电脑恒流泵(上海泸西 分析 仪器厂)，UVD6802紫外检测仪(上海金达生化仪器厂)，Hersham Bioscience公司产品。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为玻璃色谱柱（40 m×1.5 cm），内填Sephadex G10凝胶；流动相A为pH7.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钠21.85 g和磷酸二氢钠6.08 g，加水1 000 mL，调pH值为7.0)，流动相B为超纯水；流速为1.0 mL/min；检测波长为254 nm。 　　2.2 系统适用性试验［4］ 　　分别以流动相A、B为流动相，取0.1 mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液200 μL注入色谱仪， 理论 塔板数按蓝色葡聚糖2000峰 计算 分别为1 968、1 639，拖尾因子分别为1.7、1.1，在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000保留时间的比值为1.01，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值都在0.93～1.07之间，另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液200 μL，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差为0.35％。 　　2.3 标准曲线绘制 　　取头孢噻肟对照品约0.25 g置50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液各200 μL，记录色谱图，以质量浓度(ρ)为横坐标， 峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，回归方程为：ρ=8.714×106A+31788(n=5,r=0.9998)。实验表明，在0.025～0.4 mg/mL质量浓度范围内与峰面积线性关系良好。 　　2.4 精密度和稳定性试验