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卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抑制氧化损伤的作用.doc
卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抑制氧化损伤的作用
作者:陆家政,杜一凡,韦国锋,李振中
【摘要】 目的 研究卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抗氧化的作用。方法 利用光照核黄素产生超氧阴离子自由基O2-·和Fenton反应产生羟自由基·OH,用分光光度法测定卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基的作用,用硫代巴比妥酸( TBA)分光光度法研究卟啉荧光素对·OH诱发卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤的抑制作用。结果 卟啉荧光素二元化合物能有效清除活性氧自由基,对卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤有显著抑制作用。结论 卟啉荧光素二元化合物是一种良好的体外抗氧化剂。
【关键词】 卟啉荧光素;活性氧自由基;抗氧化;体外
Abstract:Objective Study the scavenging effects of porphyrinfluorescEin hybrid on scavenging of reactive oxygen species and inhibition of oxidative damages in vitro. Methods The scavenging effects of porphyrinfluorescEIn hybrid on reactive oxygen species·OH and O2-· generated by Fenton reaction and riboflavin photosensitization eans of spectrophotometry. And the inhibition effects of porphyrinfluorescein hybrid on lipid peroxidation in the presence of lecithin and oxidation damage of DNA chain induced by hydroxyl radical etry age of DNA by hydroxyl radical. Conclusion The porphyrinfluorescein hybrid .Base公司);芦丁标准品、蛋氨酸、鲱鱼精DNA(Sigma公司);核黄素(VB2)、番红花红(Safranine T)、2硫代巴比妥酸(TBA)(AR, FLUKA公司);三氯乙酸(TCA)(上海试剂一厂);所用试剂均为分析纯。
Shimadzu UV3101 PC 光谱仪(日本岛津公司);光照箱,自制, 35 cm×30 cm ×25 cm,光源为纯稀土节能灯,灯功率45 ANJ20XPI, 美国 BECKMAN 公司)。
1.2 方法
1.2.1 超氧阴离子自由基的产生及清除活性测定
采用光照核黄素[5-7]的方法,用0.05 mol·L-1、pH=7.4的PBS缓冲液为溶剂,配制3.5×10-6 mol·L-1核黄素,0.01 mol·L-1蛋氨酸, 4.5 ×10-5 mol·L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各2.0 mL,加入各种浓度的卟啉荧光素(样品)溶液1.0 mL,空白管以1.0 mL缓冲液代替样品溶液。置于光照箱中光照30 min,取出后以缓冲溶液为参比,于590 nm处测定溶液的吸光度。清除率按下式 计算 :A0为空白管的吸光度,A样为样品管的吸光度。
1.2.2 羟自由基的产生及清除活性测定[4,8]
采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基( Fenton反应),该反应产生的羟自由基可使番红花红褪色,针对这一特点来研究卟啉荧光素对羟自由基的清除能力。取0.15 mol·L-1、pH 7.4 的磷酸缓冲溶液1.0 mL, 40 μg·mL-1番红花红1.0 mL, 0.195 mmol·L-1 EDTAFe (Ⅱ) (新鲜配制) 1.0 mL, 不同浓度的卟啉荧光素 (样品) 0.5 mL,3% H2O2 1.0 mL (新鲜配制),混合后在37 ℃水浴中反应30 min, 在520 nm 处测定吸光度,以A样表示。空白组以0.5 mL蒸馏水代替样品,测定吸光度A0,对照组以1.5 mL蒸馏水代替H2O2 和样品,测定吸光度A,用3.5 mL蒸馏水代替番红花红、EDTAFe (Ⅱ) 、H2O2 、样品,用1.0 mL磷酸盐缓冲溶液调零。按下式计算清除率:
清除率(%)=A样-A0A-A0×100%
1.2.3 对脂质过氧化抑制活性的测定[4-8]
取0.12 mL卵磷脂溶液( 300 mg 卵磷脂溶解于30 mL 10 mmol·L-1 、pH 7.4 的PBS
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