卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抑制氧化损伤的作用.docVIP

　　卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抑制氧化损伤的作用 作者：陆家政，杜一凡，韦国锋，李振中 【摘要】 目的 研究卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基及抗氧化的作用。方法 利用光照核黄素产生超氧阴离子自由基O2-·和Fenton反应产生羟自由基·OH，用分光光度法测定卟啉荧光素二元化合物体外清除活性氧自由基的作用，用硫代巴比妥酸( TBA)分光光度法研究卟啉荧光素对·OH诱发卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤的抑制作用。结果 卟啉荧光素二元化合物能有效清除活性氧自由基，对卵磷脂脂质过氧化和DNA氧化损伤有显著抑制作用。结论 卟啉荧光素二元化合物是一种良好的体外抗氧化剂。 【关键词】 卟啉荧光素；活性氧自由基；抗氧化；体外 　　Abstract:Objective Study the scavenging effects of porphyrinfluorescEin hybrid on scavenging of reactive oxygen species and inhibition of oxidative damages in vitro. Methods The scavenging effects of porphyrinfluorescEIn hybrid on reactive oxygen species·OH and O2-· generated by Fenton reaction and riboflavin photosensitization eans of spectrophotometry. And the inhibition effects of porphyrinfluorescein hybrid on lipid peroxidation in the presence of lecithin and oxidation damage of DNA chain induced by hydroxyl radical etry age of DNA by hydroxyl radical. Conclusion The porphyrinfluorescein hybrid .Base公司）；芦丁标准品、蛋氨酸、鲱鱼精DNA（Sigma公司）；核黄素(VB2)、番红花红(Safranine T)、2硫代巴比妥酸(TBA)（AR, FLUKA公司）；三氯乙酸(TCA)（上海试剂一厂）；所用试剂均为分析纯。 　　 　　Shimadzu UV3101 PC 光谱仪（日本岛津公司）；光照箱，自制, 35 cm×30 cm ×25 cm，光源为纯稀土节能灯，灯功率45 ANJ20XPI， 美国 BECKMAN 公司）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 超氧阴离子自由基的产生及清除活性测定 　　采用光照核黄素［5-7］的方法,用0.05 mol·L-1、pH=7.4的PBS缓冲液为溶剂,配制3.5×10-6 mol·L-1核黄素，0.01 mol·L-1蛋氨酸， 4.5 ×10-5 mol·L-1氯化硝基四氮唑兰(NBT)。分别取上述3种溶液各2.0 mL,加入各种浓度的卟啉荧光素(样品)溶液1.0 mL，空白管以1.0 mL缓冲液代替样品溶液。置于光照箱中光照30 min，取出后以缓冲溶液为参比，于590 nm处测定溶液的吸光度。清除率按下式 计算 ：A0为空白管的吸光度，A样为样品管的吸光度。 　　1.2.2 羟自由基的产生及清除活性测定［4,8］ 采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基( Fenton反应)，该反应产生的羟自由基可使番红花红褪色，针对这一特点来研究卟啉荧光素对羟自由基的清除能力。取0.15 mol·L-1、pH 7.4 的磷酸缓冲溶液1.0 mL, 40 μg·mL-1番红花红1.0 mL, 0.195 mmol·L-1 EDTAFe (Ⅱ) (新鲜配制) 1.0 mL, 不同浓度的卟啉荧光素 (样品) 0.5 mL，3% H2O2 1.0 mL (新鲜配制),混合后在37 ℃水浴中反应30 min, 在520 nm 处测定吸光度，以A样表示。空白组以0.5 mL蒸馏水代替样品，测定吸光度A0，对照组以1.5 mL蒸馏水代替H2O2 和样品，测定吸光度A，用3.5 mL蒸馏水代替番红花红、EDTAFe (Ⅱ) 、H2O2 、样品，用1.0 mL磷酸盐缓冲溶液调零。按下式计算清除率: 　　清除率(％)=A样-A0A-A0×100% 　　1.2.3 对脂质过氧化抑制活性的测定［4-8］ 取0.12 mL卵磷脂溶液( 300 mg 卵磷脂溶解于30 mL 10 mmol·L-1 、pH 7.4 的PBS