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　　哈蟆油质量控制方法 【摘要】 　　根据 历史 　　4.4.2 紫外光谱法李明刚等［10］在0～360 nm下对哈蟆油和中华大蟾蜍输卵管95％乙醇浸出物进行了紫外检测，结果哈蟆油9个吸收峰分别位于4，114，129，252，256，275，311，312，314 nm；中华大蟾蜍输卵管8个吸收峰分别位于4，113，131，216，245，275，298，315 nm；王丽兰等［11］紫外光谱法测定了哈蟆油中总核酸的含量为2.69%，DNA为（0.13±0.01）%，RNA为（2.56±0.05）%。2006年，作者报道了采用紫外谱线组法，对不同产地和不同溶剂提取的哈蟆油正品和伪品的紫外及其一阶导数光谱进行了检测，为哈蟆油的质量控制和真伪鉴别提供了依据［12，13］。 　　4.4.3 红外光谱法对哈蟆油的红外光谱的报道较少，丘泽雨等［14］对不同产地的珍珠、蟾蜍、哈蟆油、冬虫夏草、五灵脂的同种药材进行了对比研究，并用红外光谱法进行了药材真伪优劣鉴别。 　　4.4.4 原子吸收光谱法和发射光谱法王秋雨等［8］用原子分光光度计(VARIAN Aa220)和等离子发射光谱仪(日立Z - 8200) 测定了哈蟆油与青蛙油中微量元素和重金属的含量，结果哈蟆油与青蛙油均含有人体必需的常用微量元素,但青蛙油中重金属Pb及Hg 含量超标。李媛媛等［15］采用等离子体发射光谱法对国产和俄罗斯产哈蟆油无机元素的含量进行了分析。 　　4.5 色谱分析法 　　4.5.1 薄层色谱法刘永镇等［15］研究证实,用丙酮提取物乙醚萃取后的残留物,在石油醚∶醋酸乙酯（4∶1）展开的薄层层析中,其Rf值为0.4，用展开剂苯∶乙醚∶甲醇（10∶5∶0.8），显色剂（茴香醛∶冰乙酸∶浓硫酸1∶100∶2）测定,效果良好。李明刚等［10］采用苯∶乙醚∶甲醇（10∶5∶0.8）为展开剂，茴香醛∶冰乙酸∶浓硫酸（1∶100∶2）为显色剂，对哈蟆油和中华大蟾蜍输卵管进行了鉴别。赵文英等［16］用丙酮连续回流提取法，以石油醚：醋酸乙酯（4∶1）为展开剂，36％的乙酸∶浓硫酸（1∶1）为显色剂，展距20 cm，分别在 自然 光及紫外光（365 nm）下，对不同来源的哈蟆油正品以及不同种类的伪品进行了鉴别。目前，作者正在对哈蟆油进行系统的薄层色谱研究，比较不同极性的溶剂和提取方法下哈蟆油的薄层效果从而建立哈蟆油系统的薄层色谱条件，建立哈蟆油专属性鉴别方法。 　　4.5.2 高效液相色谱法李成义等［17］应用HPLC测定了哈蟆油中磷脂的含量；多年来，作者对哈蟆油的有效成分进行了较深入地研究，已分离出了多个化合物［18］，其中，十六烷酸胆甾醇酯为首次从哈蟆油中提取纯化出来的，作者以十六烷酸胆甾醇酯为化学对照品，利用HPLC法对哈蟆油进行了含量测定及其方法学的研究，为建立一个完整、 科学 的哈蟆油质量评价方法提供依据［19］。李津明等［20］采用了反相高效液相色谱技术，对10批不同来源的林蛙油药材建立了高效液相色谱指纹图谱，从而提高了哈蟆油的质量控制技术。 　　4.5.3 气相色谱-质谱法赵文英等［21］利用气相色谱-质谱法(GC-MS) ，对哈蟆油石油醚提取物分离出的脂肪酸进行分析，发现哈蟆油不饱和脂肪酸含量约占脂肪酸含量的40%；卢立明等［22］利用GC-MS 对哈蟆油脂溶性部分的化学成分进行了研究，结果表明哈蟆油中含有多种不饱和脂肪酸和奇数碳原子脂肪酸。李成义等［17］利用GC-MS法，从吉林产哈蟆油中检定出9 种酸。其中亚油酸的相对百分含量为36.05%,花生四烯酸的相对百分含量为1.63%。刘玉翠等［23］利用GC-MS法对哈蟆油的一组脂溶性成分进行分析,共分离鉴定了5 种酯类化合物。季怡萍［24］用气相色谱(GC) 与气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对哈士蟆油中的脂肪酸组成进行了定性与定量分析, 共鉴定出10 种脂肪酸并用气相色谱法作了定量。王秋雨等［8］利用气相色谱-质谱(GC-MS)测定哈蟆油与青蛙油脂类物质含量基本一致，约为6%，其中不饱和脂肪酸含量分别占其脂肪酸的77.26%和64.67%。 　　4.6 电泳分析法赵华英［25］采用PA-GE 技术, 对哈士蟆油及其伪品: 黑斑蛙(习称青蛙)、中华大蟾蜍的输卵管进行酯酶同工酶和可溶性蛋白质的电泳分析。结果酯酶同工酶图谱可见： 哈士蟆油共有2 条谱带，A 区1 条三级带，B 区1 条一级带。黑斑蛙有7 条谱带， 分布在B 区和C 区。中华大蟾蜍有2 条谱带，分布在B 区和C 区。可溶性蛋白质电泳图谱。可见哈士蟆油在C 区有C2 和C6 2 条一级带可与伪品鉴别。因为黑斑蛙只有C3 一级带，而中华大蟾蜍C 区无一级带。曾明［26］、石俊英等［27］采用凝胶电泳法测得哈蟆油一级带三条，二级带两条，三级带