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2.2动物细胞工程 三、动物细胞融合与单克隆抗体 1.细胞融合： 是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。 原理 细胞膜的流动性 诱导因素： 聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。 仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但并不破坏病毒的抗原结构。 ②灭活病毒诱导细胞融合的原理 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 ①什么是病毒的灭活？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 正在融合的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞 ⑶动物细胞融合的原理： 细胞膜的流动性 把两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细胞，它们先发生质融合，再出现核融合，进而形成杂交细胞。 融合后的杂交细胞经过有丝分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞 2.动物细胞融合技术的应用： ⑴突破了有性杂交的局限，使远缘杂交 成为可能； ⑵为制造单克隆抗体开辟了新途径 使用相应的抗体检测 乙肝病毒——抗原 3.单克隆抗体的制备 医院一般怎样检测人体内是否存在乙肝病毒？ 乙肝病毒模式图 凡能够引起机体产生特异性 免疫应答的物质叫做抗原。 ⑴什么是抗原？ 例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。 ⑵什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里?起何作用？ 当机体受到抗原刺激剂后由效应B细胞（浆细胞）产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白——抗体。 抗体分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 抗体与相应抗原特异性结合 血清抗体（也称多克隆抗体） 由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。 特点： 产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。 抗原不纯 抗体不纯 抗原 动物体内 刺激 效应B 抗体 每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体。 问题： 怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？ 在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞能无限增殖形成细胞群吗？ 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？ ——肿瘤细胞！ 科勒 米尔斯坦 荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。 ⑵如何诱导融合？ 加入聚乙二醇（PEG） ⑴如何得到B淋巴细胞？ 3.制备单克隆抗体的过程 ⑶细胞两两融合后，有哪些类型？ B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞？ 单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。 ①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种