局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κB的表达.docVIP

　　局灶性脑缺血再灌注损伤后杏仁核和海马环氧酶、脂氧酶及核因子κB的表达 【摘要】 目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(CIRI)后杏仁核和海马环氧酶2(COX2)、5脂氧酶(5LO)和核因子κB(NFκB)的表达情况,探讨其损伤机制。 方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞2 h/再灌注24 h模型。免疫组织化学法检测杏仁核和海马COX2、5LO和NFκB蛋白表达,计数COX2、5LO和NFκB阳性细胞数,Motic Images Advanced 3.0图像 分析 系统作半定量分析。结果CIRI后大鼠杏仁核和海马COX2、5LO和NFκB阳性细胞计数明显增高(Plt;0.001),平均灰度值显著下降,表达增强(Plt;0.001)。结论CIRI后大鼠杏仁核和海马区域的COX2、5LO和NFκB表达增强,继而引发后续反应,介导神经损伤。 【关键词】 脑缺血 再灌注损伤 杏仁核 海马 环氧水解酶类 杏仁核和海马是边缘系统的重要核团,它们之间不仅解剖位置紧临,其关系也很密切。 目前 对海马在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)中神经细胞的凋亡情况已有报道[1]。本课题组既往的 研究 表明,局灶性CIRI后大鼠杏仁核出现缺血坏死、水肿,正常锥体神经元密度减少[2],其机制可能与MMP9、AQP4表达增加有关。笔者从花生四烯酸(arachidonic acid,AA)代谢通路主要限速酶——环氧酶2(cyclooxygenase2,COX2)和5脂氧酶(5lipoxygenase,5LO)在CIRI中的活化,以及核因子κB(nuclear factorkappa B,NFκB)介导神经细胞损伤的角度,研究局灶性CIRI后大鼠杏仁核和海马COX2、5LO和NFκB的表达情况,以期进一步探讨杏仁核和海马在CIRI中的损伤机制。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1动物SpragueDapus公司);Motic Images Advanced 3.0图像分析系统(香港麦克奥迪公司);5LO、COX2、NFκB兔抗大鼠单克隆抗体(美国Cayman公司);SABC兔IgG免疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉Boster公司);枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液(北京中山生物技术有限公司);其余试剂均为国产分析纯。 1.2方法 1.2.1模型制备SD大鼠随机分假手术组和模型组。模型组参照 3讨论 研究 证明,大鼠局灶性CIRI后,海马CA1区神经细胞凋亡明显增加,以抗凋亡药物干预可有效减轻CA1区的损伤[4]。Zhang等在大鼠低温心肺分流模型中发现海马CA1区在心肺分流后凋亡相关基因活性增强,并出现神经细胞凋亡[5]。笔者既往已证实局灶性CIRI后大鼠杏仁核可见缺血坏死、水肿,正常锥体神经元密度减少[2],可见CIRI后海马和杏仁核确实出现了神经细胞损伤。本实验进一步发现局灶性CIRI后海马和杏仁核均有COX2、5LO和NFκB的大量表达。由于COX2和5LO为AA代谢通路中主要的的限速酶，AA经由这两条途径代谢后,一方面产生氧源性自由基,另一方面经COX2和LO催化产生前列腺素、血栓素、白三烯等脂质炎症介质,此为引起CIRI的重要因素[67]。NFκB为即早基因家族,在脑缺血损伤初期即有NFκB的激活。活化的NFκB可以进入细胞核,并可以调控COX2和5LO等成分的转录[8],引发后续的神经损伤。 3.1CIRI后杏仁核和海马COX2高表达的损伤作用CIRI后杏仁核和海马神经突触活动增强,激活谷氨酸受体,COX2表达上调,反应产物增多。本实验发现CIRI后COX2的表达增强,主要分布在杏仁核、海马和皮质区。COX2的高表达使其反应产物PGE2增加，PGE2一方面可增强N甲基D天冬氨酸介导的神经毒性作用而引起脑损伤[9],并使谷氨酰胺释放增加,进一步导致AA释放增多,AA在代谢过程中伴有氧自由基生成增多,使脑组织脂质过氧化,加重脑损伤[10],另一方面以时间依赖方式激活caspase3,诱导神经细胞凋亡。本实验中假手术组的杏仁核和海马区域则仅有极少量的COX2表达。笔者已证实选择性COX2抑制剂可有效减少CIRI后的神经细胞凋亡[6],由此可见CIRI后COX2的高表达确实导致了杏仁核和海马区的神经损伤。 3.2CIRI后杏仁核和海马5LO高表达的损伤作用本实验证实CIRI后大鼠杏仁核和海马5LO的活性增强。5LO的活性增强可大量催化AA生成白三烯，后者可介导炎症,诱导平滑肌收缩、微血管渗漏等。白三烯还可促进N甲基D天冬氨酸介导的神经