新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响.docVIP

　　新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响 作者：和钢 乐东海 杨 山冬 张顺 李克强 【摘要】 目的：观察新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响。方法：以48例具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者为研究对象，采用RTPCR技术，联合检测外周血中CK19mRNA、VEGFmRNA和hMAMmRNA的表达，观察新辅助化疗前后血微转移因子变化。结果：本组乳腺癌微转移因子阳性率在病理分级中差异无显著性意义(Pgt;0.05);在分期中，分期越高阳性率越高(Plt;0.05);化疗方案可影响微转移因子阳性率的变化(Plt;0.01)。结论：通过检测乳腺癌患者外周血中微转移因子，有可能成为判断乳腺癌预后和指导 治疗 的指标。 【关键词】 乳腺癌 新辅助化疗 微转移因子 逆转录聚合酶链反应 Neoadjuvant Chemotherapy for Peripheral Blood Micrometastasis Factors in Patients of Breast Cancer HE Gang,et al.Ningbo No.2 Hospital,Ningbo(315010),China 　　Abstract Objective:To explore the influence of neoadjuvant chemotherapy on peripheral micrometastasis factors in breast cancer.Methods:CK19mRNA,VEGFmRNA and hMAMmRNA in peripheral blood of 48 breast cancer patients otherapy.Results:No significant difference in the breast micrometastasis factors icrometastasis factors otherapy had positive effect on micrometastasis factors (Plt;0.01).Conclusion:The factors of peripheral micrometastasis could be tested for breast cancer patients,guiding prognosis and treatment. 　　Key otherapy micrometastasis factor reverse transcription polymerase chain reaction(RTPCR) 　　肿瘤对化疗药物的敏感性一直是近年研究的热点。NSABPB18试验随访5年的资料证实[1]，检测外周血微转移肿瘤细胞，并选择有效药物进行治疗，是新辅助化疗亟待解决的问题。笔者选择细胞角蛋白19(CK19)、血管内皮生长因子(VEGF)和人乳腺球蛋白(hMAM)作为乳腺癌外周血微转移因子进行联合检测研究，探讨新辅助化疗对微小转移灶检测的方法和临床意义。 　　1 临床资料 　　选择2006年4月～2009年3月具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者48例，年龄35～78岁，平均47.6岁。病理分期：I～II期17例，III期31例;病理分级：浸润性低分化腺癌27例，浸润性中、高分化腺癌21例。 　 　2 方 法 　　2.1 新辅助化疗方法 48例采用CAF方案行新辅助化疗23例，予环磷酰胺600mg,第1天，氟尿嘧啶500mg,第1天，多柔比星60mg,第1天，两周方案;第1天采用AT方案行新辅助化疗25例，予紫杉醇160mg，第1天，表柔比星60mg，第1天，两周方案。分别于新辅助化疗前第1天和化疗结束后第7天检测外周血中相关基因标志物微转移因子的表达水平。48例患者之前均未行任何治疗。 　　2.2 检测方法 化疗前和化疗后分别取外周静脉血10ml，弃去采血针抽取的前2ml血，以减少标本被皮肤细胞污染可能，随后取8ml分别加入四支含EDTA的抗凝管中，充分摇匀，以PBS稀释后，采用淋巴细胞分离液离心，收集淋巴细胞和单核细胞层，洗涤后移至EP管，70℃冻存备提取RNA用。 　　2.2.1 仪器、试剂与引物 Personal Cycler型PCR仪(德国Biometra公司);GelDoc型凝胶成像分析系统(美国Biorad公司);RNA提取试剂盒和RTPCR试剂盒(Takara公司);引物(上海英骏生物技术有限公司)。VEGFC上游引物：5’GCATGAACACCAGCACGAG3’; 下游引物：5’ATGAAGGGACACAACGACAC3’，扩增产物为717bp片段。CKl9上游引物： 5’GCGACTACAG