松果菊苷对大鼠脑缺血损伤的保护作用.docVIP

　　松果菊苷对大鼠脑缺血损伤的保护作用 作者：杜娟，陈虹，姜勇，屠鹏飞 【摘要】 目的观察松果菊苷（ECH）对大鼠脑缺血损伤海马区神经细胞凋亡的影响。方法雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组、ECH大剂量组、ECH小剂量组。采用大鼠大脑中动脉线栓法（MCAO）建立局灶性脑缺血损伤模型，各组造模后24 h处死，取脑。应用HE染色法观察脑组织病理改变，脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法观察大鼠脑缺血后海马区神经细胞凋亡。结果脑缺血后，海马区神经细胞正常组织结构消失、胞核碎裂、溶解坏死等形态学改变，凋亡神经细胞数量明显增加；与模型组比较，川芎嗪组、ECH大剂量组和ECH小剂量组海马区凋亡神经细胞表达数量均有不同程度的减少。结论ECH对脑缺血大鼠脑组织具有保护作用，其机制可能与抗细胞凋亡作用有关。 【关键词】 松果菊苷； 脑缺血； 细胞凋亡 近年来脑缺血损伤与神经元死亡的关系受到广泛关注，而细胞凋亡是神经元死亡的主要方式，研究发现在缺血损伤、兴奋毒性引起的脑损伤中，神经元凋亡明显增加。脑损伤中神经元的凋亡及其发生机制现已成为广泛研究的重点。本文采用大鼠脑缺血模型，观察松果菊苷（Echinacoside,ECH）对脑缺血损伤的保护作用。 　 　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂ECH由北京大学药学院屠鹏飞教授惠赠（纯度95%以上），注射用盐酸川芎嗪（哈尔滨三联药业有限公司），红四氯唑（ 中国 华东师范大学化工厂），水合氯醛（天津市福晨化学试剂厂），多聚甲醛（天津市化学试剂研究所），细胞凋亡试剂盒（购自Promega公司），市售鱼线（直径0.26 mm）。 　　1.2 动物分组及模型制备雄性SD大鼠共50只，体质量250～300 g，购自新疆实验动物研究中心（合格证号：2009-0053）,随机分为5组：①假手术组：生理盐水1 ml·kg-1·d-1×7 d；②模型组：生理盐水1 ml·kg-1·d-1×7 d；③脑缺血+阳性药物对照组：盐酸川芎嗪50 ml·kg-1·d-1×7 d；④脑缺血+ECH大剂量组：ECH 50 mg·kg-1·d-1×7 d；⑤脑缺血+ECH小剂量组：ECH 25 mg·kg-1·d-1×7 d。各组动物每天连续腹腔注射给药7 d，于末次给药1 h后,清醒状态下用10%水合氯醛（3.0～3.5 ml·kg-1）麻醉，采用Longa等［1］提出的改良线栓法法制作大鼠左侧大脑局灶性脑缺血模型(MCAO模型)。假手术组只是鱼线插入仅10 mm，其余步骤同手术组。 　　1.3 神经功能缺失体征评分按 　　2.3 细胞凋亡 TUNEL染色光学显微镜下观察（图3）：阳性染色位于细胞胞核，呈棕黄色，正常细胞染色位于胞核，呈蓝色。①假手术组偶见细胞着棕色，细胞结构尚好；②模型组出现最为显著的神经元凋亡，表现为整个细胞皱缩，体积缩小，核固缩；③与假手术组相比，模型组海马区细胞凋亡数量明显增加；④与模型组比较，川芎嗪组、ECH大剂量组和ECH小剂量组海马区凋亡神经细胞表达数量均有不同程度的减少。 　　实验结果表明，假手术可见散在分布少量的凋亡细胞，表明正常神经细胞存在细胞凋亡。各组药物均显示明显抑制细胞凋亡的作用，与模型组比较具有显著差异。不同剂量的ECH给药均能明显减轻脑缺血后神经细胞凋亡，具有不同程度的脑保护作用，且随ECH给药剂量的增加细胞凋亡数量进一步减少。通过本实验，证实ECH对脑缺血大鼠具有较好的保护作用，缺血预处理后可明显减轻细胞凋亡数量。 　　 3 讨论 细胞凋亡是指在一定的生理或病理条件下，细胞启动自身基因调控机制，引起细胞自杀性死亡。其形态学特征为：细胞皱缩，不能与周围细胞接触，胞浆浓缩，胞体出现泡状，胞核裂解成凋亡小体，可被周围临近细胞吞噬。大量资料证明，脑缺血后脑损伤的病理变化为缺血中心区以坏死为主，半暗带区以凋亡为主。坏死是不可逆的死亡过程，而凋亡是可逆的过程，所以在缺血损伤中神经元凋亡扮演了重要角色，对凋亡机制的研究具有重要意义。目前国内外的研究均认为缺血后神经细胞凋亡主要是通过Caspase依赖途径和非Caspase依赖途径实现的，其中Caspase-3和AIF分别是这两种途径中的起作用的关键物质。凋亡诱导因子（AIF）是近年来发现的一种凋亡效应分子，正常情况下，AIF是一种定位于细胞线粒体膜间隙中的黄素蛋白，当有凋亡信号刺激时AIF分子从线粒体释放到细胞浆，再通过其核定位信号转位到细胞核中，直接引起染色体凝集和DNA呈大片段（～50 kb）断裂，导致细胞凋亡［5, 6］。 ECH是苯乙醇苷类化合物，为管花肉苁蓉中的主要有效成分。近年研究表明，ECH 具有抗SH-SY5Y神经元凋亡［7，8］、抗衰老［9］、改善学习记忆［10］等神