关于染料敏化太阳能电池一篇本科毕业论文.doc

PAGE   PAGE 3 去核時機對體細胞複製牛胚之去核準確率、發育力 及內源性基因甲基化程度之影響 Effects of Enucleation Timing on the Enucleation Accuracy, Development and Endogeneous DNA Methylation Status of the Cloned Bovine Embryos. 研究生：蘇華雲 Hua-Yun Su 指導教授：沈朋志 博士 Lien, Yi-Yang 【摘要】 本研究旨在探討去核時機（enucleation timing）對體細胞複製牛胚之去核準確率、發育力及內源性基因甲基化程度之影響。於試驗一乃利用已轉染GFP基因之單株纖維母細胞為供核源，評估體細胞複製牛胚於不同時機去核之去核準確率，以及比較以不同成熟度卵母細胞為受核源所產製複製牛胚之體外發育能力，結果顯示，利用已轉染GFP基因之單株細胞為供核源所產製之複製牛胚，其囊胚發育率與利用已轉染GFP基因之非單株細胞為供核源所產製者相近（15.4 vs. 21.7％）。利用先去核後激活（enucleation before activation, EBA）法所產製之複製牛胚，其去核成功率顯著高於利用先激活後去核（enucleation after activation, EAA）法所產製者（96.2 vs. 77.6％，P＜0.05）；但兩處理組之去核準確率（指複製囊胚表現GFP之百分率）均為100％。利用體外成熟培養14 h之未成熟卵母細胞為受核源，並以EAA法所產製之複製牛胚，其發育至16-細胞期之百分率顯著低於該受核源以體外成熟培養18 h之卵母細胞所產製者（11.7 vs. 37.5％）。於試驗二則探討去核時機對體細胞複製牛胚體外發育能力及內源性基因甲基化程度之影響，結果顯示，利用EBA法所產製複製牛胚之囊胚率稍低於利用EAA法所產製者（13.0 vs. 23.3％）（P＞0.05）；惟相同利用EAA法產製複製牛胚時，若去核時機延至細胞融合處理後8h執行者（EAA-8 h）之複製囊胚發育率則明顯低於去核時機於細胞激活處理後4 h執行者（EAA-4 h）（5.5 vs. 15.5％，P＜0.05）。然而，利用EAA法產製之10個複製牛囊胚經胚移置入6頭受胚牛後，雖有ㄧ頭受胚牛懷孕並順利分娩，但該複製仔牛於出生後不久即告死亡；而利用EBA法產製之32個複製牛囊胚，經胚移置入18頭受胚牛後均無懷孕現象。此外，在基因甲基化程度之分析結果則顯示，利用EBA與EAA法所產製複製牛囊胚之Xist基因的甲基化程度相近（81.6 vs. 76.6％），惟兩者之數值均顯著低於供核細胞之Xist gene的甲基化百分率（98.3％，P＜0.05），但均顯著高於體外受精胚者（68.3％，P＜0.05）。綜合上述資訊說明，利用EBA法產製之複製牛胚較之利用EAA法產製者具較高之去核率，但兩法之去核准確率均為100％；而利用未成熟卵母細胞為受核源所產製複製牛胚之體外發育能力較利用已成熟卵母細胞為受核源所產製者為低；且延後去核時機亦將降低複製牛胚之發育能力；惟無論如何，利用EAA法所產製複製牛胚之體外發育能力及其Xist基因之甲基化程度均與利用EBA法者相近，且利用EAA-4 h法所產製之複製牛胚可成功產仔。 關鍵詞：體細胞複製牛胚、去核時機、內源性基因甲基化程度。 【Abstract】 The objective of this study was to investigate the effects of the enucleation timing on the enucleation accuracy, in vitro and in vivo development capability, and endogenous gene methylation status of the cloned bovine embryos. In experiment 1, the single clonal bovine ear fibroblast cells with transfected GFP gene was used for donor cells to examine the effect of enuclaetion timing on the enucleartion accuracy of bovine cloned embryos. The effect of oocyte maturity on the in vitro development of bovine cloned embryos was also investigated. The