注射用丹参酮ⅡA磺酸钠细菌内毒素检查法.docVIP

　　注射用丹参酮ⅡA磺酸钠细菌内毒素检查法 【摘要】 　　目的建立检测注射用丹参酮ⅡA磺酸钠中内毒素的试验方法。方法运用干扰初筛法对供试品进行干扰试验，采用鲎试剂法对样品中的内毒素进行检测。 结果注射用丹参酮ⅡA磺酸钠在药液稀释浓度为0.016 8 mg·ml-1以下时，与鲎试剂反应无干扰。结论所采用的细菌内毒素检查法可用于注射用丹参酮ⅡA磺酸钠的内毒素检查。 【关键词】 注射用丹参酮ⅡA磺酸钠 细菌内毒素检查法 干扰试验 　　Abstract：ObjectiveTo establish a method for detection of bacterial endotoxin in sodium tanshinone IIA sulfonate injection.MethodsAfter interfering experiment, tachypleus amebocyte lysate(TAL) ed to detect the bacterial endotoxin in sodium tanshinone IIA sulfonate injection. ResultsSodium tanshinone IIA sulfonate injection did not interfere ulus agent g·ml-1. ConclusionThe bacterial endotoxin test is suitable for the detection of bacterial endotoxin in sodium tanshinone IIA sulfonate injection. 　　Key tanshinone IIA sulfonate injection; Bacterial endotoxin test; Interference experiment 　　细菌内毒素检查法又称鲎试剂法，是利用鲎试剂与细菌内毒素发生凝集反应，来检查药品中内毒素含量是否符合规定的方法，具有快速、灵敏，重复性好，操作简便的特点。 　　丹参酮ⅡA磺酸钠为丹参酮ⅡA经磺化而成的水溶性钠盐，它能增加冠脉血流量，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板集聚及抗血栓形成［1］，临床上主要用于冠心病、心绞痛等症的 治疗 。本检查法采用两个厂家的鲎试剂对3批注射用丹参酮ⅡA磺酸钠进行了细菌内毒素检查的干扰试验。现报道如下。 　　 1 材料 　　注射用丹参酮ⅡA磺酸钠（四川大学华西药学院药剂学教研室，批号：040101、040102、040103，规格：10mg）；鲎试剂（TAL：标示灵敏度0. 125 EU·ml-1，批号：0305301，标示灵敏度0.06 EU·ml-1，批号0302011，湛江安度斯生物有限公司；标示灵敏度0.06 EU·ml-1，批湛江海洋生物制品厂）；细菌内毒素工作标准品（10 EU·支-1，批号：030723， 中国 药品生物制品检定所）；细菌内毒素检查用水（BET水：含细菌内毒素lt;0.003 EU·ml-1，批号：0308050，湛江安度斯生物有限公司）。 　　Xg·60 kg-1，故 　　L=5.0 EU·Kg-1·h-11.33 mg·kg-1·h-1=3.76 EU·mg-1 　　综合考虑本品临床用药的相关因素，将本品细菌内毒素限值确定为3.75 EU·mg-1。 　　2.3 干扰试验预试验根据最小有效稀释浓度，c=λ/L，可知对应于灵敏度(λ)0.25，0.125，0.06，0.03 EU·ml-1TAL，注射用丹参酮ⅡA磺酸钠稀释浓度分别为0.067，0.033 5，0.016 8，0.008 38 mg·ml-1，用BET水将供试品(批号：040101)稀释成以上4个浓度备用。 　　取16支λ为0.125 EU·ml-1的TAL，其中8支作为供试品阴性对照NPC，即分别用0.1 m1上述稀释的4个浓度供试品复溶TAL，再各加0.1 mlBET水，每一浓度供试品 2 支反应管；另8支作为供试品阳性对照PPC，即分别用0.1 ml上述稀释的4个浓度供试品复溶TAL，再各加2λ(0.25 EU·ml-1)的内毒素溶液0.1 ml，每一浓度供试品 2 支反应管。结果见表2。本品稀释至0.016 8 mg·ml-1以下时，可能对细菌内毒素与鲎试剂的反应无干扰作用。故拟采用λ为0.06 EU·ml-1的TAL，本品0.016 8 mg·ml-1稀释浓度作正式的干扰试验。表2 样品干扰试验预试验结果（略）　　2.4 供试品干扰试验用BET水和0.0168 mg·ml-1的供试品液分别复溶TAL(λ为0.06 EU·ml-1)，然后将每一供试