清肝开窍祛风法对电点燃模型大鼠c.docVIP

　　清肝开窍祛风法对电点燃模型大鼠c 【摘要】 　　目的 研究 清肝开窍祛风法对电点燃癫痫大鼠模型的c-fos蛋白的 影响 。 方法 将利用改良的Goddard方法造模成功的电点燃大鼠癫痫模型随机分为五组：模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组。另取6只作为正常组，在造模成功后连续给予相应的药物28天后进行电刺激诱发癫痫，2h后取海马区脑组织用免疫组化法测定Fos蛋白。结果 免疫组化试验显示：大鼠电点燃癫痫模型大脑皮层、海马c-fos阳性细胞较正常组表达增强，密集分布，染色较深；而4个药物 治疗 组则表达明显减少，分布稀疏，染色较浅。结论 清肝开窍祛风法能抑制Fos蛋白的表达，各剂量组与西药组疗效相当，但治疗组各指标均未完全恢复到正常对照组水平。 【关键词】 癫痫电点燃模型　清肝开窍祛风法　c-fos蛋白　细胞凋亡 　　　癫痫是神经科的常见疾病，据统计我国每年约有65～70万新发癫痫病人，全国共有癫痫病人超过600万, 目前 癫痫的治疗以药物为主，原有一线抗癫痫药物，仅可使80%的患者发作得以控制，并有明显的毒副作用，对行为、认知功能有负面影响，还存在不同程度的耐受性，新型二线抗癫痫药及手术疗法有其严格的适应证， 经济 费用高昂，临床疗效难以肯定。故我们在长期的临床基础上以清肝开窍祛风立法，采用经验方宁痫煎剂治疗癫痫，观察该药对电点燃模型大鼠c-fos蛋白的表达的影响，现 总结 如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物 健康成年SD大鼠60只，雌雄各半，体重180～220g，由成都中医药大学实验动物中心提供（合格证号：川实动管质第9号）。 1.2 试剂 用青黛、石菖蒲、全蝎（四川省医药公司提供）为方，经成都中医药大学附属 医院 药剂加工厂煎煮、回收挥发性成分、浓缩，制成每毫升含原生药1g。丙戊酸钠口服溶液（杭州赛诺菲德拉堡民生制药有限公司 ；戊巴比妥钠（国药集团化学试剂有限公司 g/kg，换算成大鼠的剂量，每天2次灌胃。造模成功后按相应组别连续用药28天。 1.6 观察 内容 及检测指标 1.6.1 一般情况 分别观察各组大鼠造模前后及治疗前后的一半状态，包括体重、精神状态、活动情况等。 1.6.2 Fos蛋白测定 治疗观察结束后再一次诱发癫痫，2h后6组全部取样。用4%多聚甲醛PBS缓冲液灌注大鼠，断头取脑，将鼠脑浸泡于4%多聚甲醛PBS缓冲液24h，取海马区层面进行脱水、透明及石蜡包埋，然后进行免疫组化检查。 1.7 统计学方法 Fos蛋白表达、AD值和体重用SPSS统计软件11.5进行 分析 处理，采用单因素方差分析；行为观察大鼠的癫痫发作情况用Radit分析。 2 结果 2.1 一般情况 大鼠造模后，活动明显减少，进食进水量减少，蜷卧，时有湿狗样抖动，毛发直立、杂乱，体重下降（消瘦），1周后，活动较上周稍增加，但活动迟缓，时有呆立，饮食较前一周增多，体重无明显变化。给药组 治疗 1周后毛发较前光整，精神状态好转，进食进水增加，活动增多，3周后活动自如，体重增加。 2.2 Fos蛋白测定 大鼠电点燃癫痫模型大脑皮层、海马c-fos阳性细胞较正常组表达增强，密集分布，染色较深，多见褐色颗粒；而4个药物治疗组则表达明显减少，分布稀疏，染色较浅。见表1。表1 各组大鼠c-fos蛋白表达平均灰度的比较注：与模型组比较，▲▲Plt;0.01 3 讨论 中医认为本病的形成，大多由于先天因素、七情失调、饮食不节、劳累过度、头颅外伤、手术或虫体寄居，以及其他疾病之后， 现代 更有药害因素，造成肝、脾、肾等脏损伤，使脏腑功能失调，气机紊乱，痰浊阻滞，瘀血瘀阻，或风阳内动所致。 《黄帝内经素问·卷二十一·六元正纪大论篇第七十一》曰：“木发之郁，太虚埃昏，云物以扰，大风乃至，屋发折木，木有变。故民病胃脘当心而痛，上支两胁，膈咽不通，饮食不下，甚则耳鸣眩转，目不识人，善暴僵仆”。《素问·至真要大论》病机十九条：“肝者中正之官，谋虑出焉；胆者将军之官，决断出焉”， 《寿世保元》还说“肝虚生风”，说明肝的升发太过与不及，分别导致阳升风动或虚风内动，风阳上扰或风动痰升，壅滞经络，闭塞清窍，便发为癫痫。肝气暴郁，魂不附体，则出现神志丧失，包括昏迷、失神（短暂意识丧失）、无自主运动（自动症）；肝气暴郁，引动肝风，肝过主筋则出现抽筋；肝开窍于目，今肝气暴郁，魂不附肝，目失所主则出现两目上翻或凝视；厥阴之气夹痰上逆则出现口吐涎沫；肝气暴郁,则出现尖叫。肝郁化火能引动肝风，惊恐郁怒，使心肝之气不舒，气郁生痰，痰被肝风所动，则上扰清窍。《古今医鉴·五痫》：“夫痫者……原解其由，或因七情之气郁结，或为六淫之邪所干，或因受大惊恐，神气不守，或年历幼受惊，感触而成，皆是痰迷心窍，如痴如愚，治之不必