第4讲RNA生物合成.pptVIP

第四讲 RNA的生物合成;;RNA代谢 ;一、RNA合成的特征;转录起始点及有关位置表示方法：; 1. RNApol的结构;; 1. 定义; 2. Promoter的结构;图4 – 6 一个典型的启动子含有三个部分，由在-35、-10 和起始原点的共有序列组成。;;图4 – 4 启动子的共有序列和RNA聚合酶的结合部位。 ; 表4-2 E.coli 不同 σ 的识别序列（promote区）; 1 RNA合成的起始;Figure 4 –12 RNA polymerase passes through several steps prior to elongation. A closed binary complex is converted to an open form and then into a ternary complex. ; RNA-DNA杂交区约12bp;图4 – 16 RNA延伸的图解;;3 RNA合成的终止 一旦RNA聚合酶启动了基因转录，它就会沿着模板5‘→3’方向不停地移动，合成RNA链，直到遇到终止信号时才释放新生的RNA链，并与模板DNA脱离。??? 研究RNA链终止时遇到最常见的问题是3端核苷酸的定位，因为活细胞内部根据终止信号正确终止的RNA与一个经过剪接的RNA在3端没有两样，都是-OH基团。模板DNA上都有终止转录的特殊信号--终止子，每个基因或操纵子都有一个启动子，一个终止子。在新生RNA中出现发卡式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3端部分出现不稳定的rU·dA区域。 ;（1） 依赖于ρ因子的终止??? ρ因子是一个相对分子质量为2.0×105的六聚体蛋白，它能水解各种核苷三磷酸，实际上是一种NTP酶，同时具有解螺旋酶的活性。 ??? 有人认为，在RNA合成起始以后，ρ因子即附着在新生的RNA链上，靠ATP水解产生的能量，沿着5′→3 ′方向朝RNA聚合酶移动，到达RNA的3 ′-OH端后取代暂停在终止位点上的RNA聚合酶，它所具有的RNA-DNA解螺旋酶活性使转录产物RNA从模板DNA上释放，随后，转录复合体解体，完成转录过程。终止过程需要消耗能量。 ;Figure 4 – 19 A rho-dependent terminator has a sequence rich in C and poor in G preceding the actual site(s) of termination. ;;（2）不依赖于ρ 因子的终止??? 若终止点上游存在一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构；在终止点前面有一段由4-8个A组成的序列，导致转录产物的3′端为寡聚U。这两种结构特征的存在同样决定了转录的终止。???? 在新生RNA中出现发卡式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3端部分出现不稳定的rU·dA区域。 ;图4 – 18 RNA合成时的发卡终止结构。;;（3）抗终止;DNA与RNA合成的不同点：?? 从DNA合成反应的化学本质、极性和模板的使用这三方面来说，转录与复制是相同的。但是，也存在三个主要不同点： ?? A． 转录中不需要RNA引物； ?? B．转录反应一般只用一小段DNA做模板； ?? C．在转录区，一般都只有一条DNA链可以作为模板。 ; 表4-3 真核生物RNA聚合酶; 真核生物的RNA聚合酶一般由8～16个亚基所组成，相对分子质量超过5x105 。 虽然不同生物3类RNA聚合酶的亚基种类和大小各异，但具有相似性。存在两个普遍遵循的原则：一、聚合酶有两个相对分子质量超过1x105的大亚基；二是同种生物3类聚合酶有共享小亚基的倾向。（见下表）;RNA聚合酶I RNA聚合酶II RNA聚合酶III RPA1 RPB1 RPC1 RPA2 RPB2 RPC2 RPC5 RPB3 RPC5 RPC9