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2017-05-04 发布于重庆
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生物技术第4讲.ppt

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生物技术第4讲

阳性杂交瘤细胞的筛选生物技术学院董文其 ; 实验目的：学会观察细胞克隆，从融合的杂交瘤细胞中筛选出分泌特异性抗体的细胞。; 包被缓冲液(pH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):　　　　　　Na2CO３ 1.59g 　　　　　　NaHCO３　 2.93g　　　　　　加蒸馏水至 1000ml 洗涤缓冲液(pH7.4 0.15M PBS):　　　　　　KH2PO4 　　　　　 0.2g　　　　　　Na2HPO４·12H2O　　 2.9g　　　　　　NaCl　　　　　　　 8.0g　　　　　　KCl　　　　　　　 0.2g　　　　　 Tween-20　0.05％　 0.5ml　　　　　加蒸馏水至 1000ml;包被抗原：pH9.6碳酸盐缓冲液（CBS）稀释抗原，加入到酶标板中，100μL/孔，37℃ 2小时或4℃过夜。甩干，洗涤3次，3分钟/次。封闭（血清或脱脂奶粉）：此步有时用，有时不用。加被检样品（一抗），100μL/孔，37℃ 半小时，甩干，洗涤3次，3分钟/次。加酶标抗体（二抗），100μL/孔，37℃ 半小时，甩干，洗涤3次，3分钟/次。显色： 5ml的显色A液,5ml的显色B液，100μL/孔，37 ℃反应10～20分钟。终止反应：加2M H2SO4，50μL/孔。结果判定。肉眼或用酶标仪在450nm波长下测定OD值。本实验室目前采用洗板机进行洗涤。