竹节人参对缺氧耐受小鼠兴奋性氨基酸的影响.docVIP

　　竹节人参对缺氧耐受小鼠兴奋性氨基酸的影响 【摘要】 　　目的 探讨竹节人参对小鼠缺氧耐受形成中脑组织兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。方法将小鼠用竹节人参处理后，建立小鼠急性重复缺氧耐受模型，观察竹节人参对缺氧耐受形成中脑组织中的谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸(Gly)的影响。结果竹节人参对正常脑组织EAA含量无影响，可使缺氧耐受形成中脑组织Glu，Asp含量降低，对GABA，Gly无明显影响。结论竹节人参能明显降低缺氧脑组织中EAA含量，从而发挥对脑损伤的保护作用。 【关键词】 竹节人参； 缺氧耐受；兴奋性氨基酸；脑组织 　　Abstract:ObjectiveTo study the effect of Panax japonicus on the contents of the excitatory amino acid (EAA) in the brain tissue of mouse odel of oxygen deficiency ice.The contents of glutamate(Glu), asparate(Asp), gama-aminobutyric acid(GABA) and glycine(Gly) in the brain tissue al brain tissue, but it could decrease the contents of Glu and ASP in mice ino Acid; Tissue of brain 竹节人参（Panax japonicus C.A.Mey）含有多种氨基酸（如门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、组氨酸、甘氨酸、丙氨酸……）人参皂苷、三七皂苷等成分［1，2］，兼有人参和三七两药之功效，具有滋补强壮、活血化淤等的作用［3］。而生长在有“ 中国 硒都”之称的湖北恩施深山丛林中的竹节人参，由于其富硒而使药效独特，疗效显著。现已大规模种植，资源极为丰富，家种竹节人参具有野生竹节人参一样的药用价值［4］。本实验以小鼠为对象，建立急性重复缺氧模型，旨在研究竹节人参对缺氧耐受小鼠脑组织中兴奋性氨基酸(excitatory amino acid,EAA)的影响，为深度开发湖北恩施富硒竹节人参提供理论依据。 　　1 器材 　　1.1 试剂和仪器谷氨酸(glutamate Glu)、天冬氨酸(asparate Asp)、γ-氨基丁酸(gama-aminobutyric acid GABA)、甘氨酸(glycine Gly)标准品均为美国Sigma公司产品，纯度为99.99%，其它试剂均为国产分析纯。TG328A型 电子 分析天平；RE-52型旋转蒸发器；DL-50型超级恒温器；GL-20G高速冷冻离心机； LC-10Ａ高效液相色谱仪 (日本岛津)。 　　1.2 动物昆明种小鼠80只，体重（20.0±2.1）g，雌雄各半，由湖北省实验动物中心提供。 　　1.3 竹节人参注射剂的制备竹节人参购自恩施中药材公司。取根粗粉用水煎煮后采用沉淀法制备成注射剂（由本院中药制剂实验室制备）。相当生药含量为2 g/ml，用时以生理盐水稀释成0.4 g/ml。 　　2 方法 　　2.1 实验分组及处理随机将昆明种小鼠分为8组：正常对照组、竹节人参对照组、1次缺氧模型组、1次缺氧竹节人参组、2次缺氧模型组、2次缺氧竹节人参组、3次缺氧模型组、3次缺氧竹节人参组，每组10只。 竹节人参对照组、1次缺氧竹节人参组、2次缺氧竹节人参组、3次缺氧竹节人参组小鼠均腹腔注射药物10 ml/kg，正常对照组、1次缺氧模型组、2次缺氧模型组和3次缺氧模型组小鼠均腹腔注射等量生理盐水。1次/d，连续给药2 d，试验前30 min给药1次。 　　2.2 急性重复缺氧模型的建立将上述药物处理后的小鼠，除正常对照组和竹节人参对照组外，按急性重复缺氧方法，分别置于含有新鲜空气，经过标定的150 ml广口瓶内。以橡皮塞密闭，记时，一旦出现喘气呼吸，立即取出，并随即转移到另一相似体积，含有新鲜空气的广口瓶内，密闭，记时。依此类推至3次，实验室温度（20±2）℃。 　　2.3 测定方法和指标将急性重复缺氧处理后的小鼠处死，取出双侧脑组织，在冰台上迅速分离双侧前脑皮质和海马，以冰生理盐水冲洗后除去残血，吸干后称重，按1∶9比例加入无水乙醇，以高速匀浆机在冰浴下制成10%脑匀浆液。匀浆条件为10 s/次，停15 s，共计4次。将匀浆液于3 500 r/min(4℃)离心5 min，分离上清液，于-30℃保存待测。测试前标本复溶，再1 000 r/min(4℃)离心10 min，取上清液，检测条件及方法按Chen 等［5］建立的高效液相色谱仪法进行，进样