紫杉醇对人骨肉瘤细胞凋亡及对bcl2、bax基因表达的影响.docVIP

　　紫杉醇对人骨肉瘤细胞凋亡及对bcl2、bax基因表达的影响 作者：张春林，曾炳芳，董扬，张长青，眭述平，罗从风，陆男吉，高峰 【摘要】 目的了解紫杉醇诱导人骨肉瘤细胞的凋亡效果，以及凋亡与bcl2和bax表达之间的关系。 方法 用不同浓度的紫杉醇作用于骨肉瘤细胞MG63。采用胎盼蓝染色法，于细胞记数板进行活细胞率检测 计算 。采用光镜和 电子 显微镜对细胞形态改变进行观测，采用原位缺口末端标记凋亡检测法（TUNEL）和流式细胞术（AnnexinVFITC PI）对细胞凋亡进行检测。采用免疫组织化学法对凋亡调节基因bcl2和bax表达进行检测。结果骨肉瘤活细胞率随着紫杉醇作用时间延长和浓度增高而降低。紫杉醇诱导骨肉瘤细胞MG63凋亡表现为典型的凋亡特征，包括：细胞形态学改变，细胞染色质浓聚，染色质新月形变，胞核碎裂等。TUNEL法检测到了细胞DNA片段的断裂。随着细胞凋亡的发生，开始出现G2/M期阻滞。紫杉醇可以降低凋亡相关基因bcl2的表达和增加bax基因的表达。结论紫杉醇可以通过时间依赖性和剂量依赖性方式，促使细胞G2/M期阻滞和抑制细胞有丝分裂，从而诱导人骨肉瘤细胞凋亡。这种凋亡可能受到凋亡相关基因bcl2低表达和bax高表达的调控。 【关键词】 紫杉醇；凋亡；骨肉瘤；bcl2；bax 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the apoptosis in human osteosara cells induced by paclitaxel,and the relationship betined by cell count in a cytometer chamber.Viability orphologic alterations itting electron microscope. The percentage of apoptosis of osteosara cell MG63 easured by TdTmediated dUTP Nick End Labeling technique(TUNEL) staining method and floetry using Annexin V/PI double staining method after 0, 24, 48,72 and 96 hours of culture in the presence or absence of paclitaxel. The expression of apoptosisregulated gene bcl2 and bax munohistochemical staining.ResultsA timedependent and dosedependent cell groorphological changes of chromatin condensation, chromatin crescent formation,nucleus fragmentation.The DNAcleavage proved the expression of apoptosisregulated gene bax. ConclusionPaclitaxel is able to induce the apoptosis in human osteosara cells through the initiation of G2/M phase arrest and inhibiting mitosis in both a timedependent and dosedependent manner.This apoptosis maybe mediated by doan coulter公司。bcl2和bax单克隆抗体购自华美生物技术有限公司。 　　1.2细胞培养和条件人骨肉瘤细胞MG63获得自中山大学病理系（细胞源自美国ATCC细胞库）。采用不同作用时间（24~96h）和不同浓度（0.001~1μmol·L-1）紫杉醇对骨肉瘤细胞MG63进行作用。 　　1.3体外细胞生长抑制检测采用0.4%(G63细胞生存能力进行评估，细胞培养48h后，被不同浓度的紫杉醇作用24~96h，然后用0.25%胰酶消化收集，采用0.4%胎盼蓝染色，于细胞记数板记数计算活细胞率。每种条件重复3次，取均值。 　　1.4电子显微镜观察细胞被0.1μmol·L-1紫杉醇作用后24~96h，用胰酶消化后收集，用4%戊二醛固定，浸泡于Epon821中，用包埋液包埋，于60℃烘箱内固化72h。超薄切片机切片约50~60nm厚，用3%醋酸铀枸橼酸铅双染色，然后用透射电镜观察，并拍照。