缺血预处理对心肌梗死大鼠心肌肝细胞生长因子表达的影响.docVIP

　　缺血预处理对心肌梗死大鼠心肌肝细胞生长因子表达的影响 作者：邢邯英 李晓慧 野战鹰 赵晓云 张萍 【摘要】 目的 通过观察大鼠心肌梗死和远距缺血预处理后缺血心肌中肝细胞生长因子(HGF)基因表达的变化，探讨HGF在远距缺血预处理中的作用。方法 实验分组：① 急性心肌梗死组;②下肢缺血预适应组：夹闭双侧股动脉后再灌注，重复4次后结扎左前降支。③肾缺血预适应组：夹闭双侧肾动脉再灌注，重复3 次后结扎左前降支。④正常对照组。用evansTTC染色法区分梗死区和缺血区心肌，切取梗死区心肌及缺血区心肌并称重。用RTPCR法检测大鼠缺血区心肌HGF mRNA表达。结果 除了正常对照组外其他三组缺血程度无明显差异;而肾缺血预处理组心肌梗死程度(46.18%±6.15%)、下肢缺血预处理组梗死程度(46.92%±6.69%)较急性心肌梗死组(66.44%±13.68%)相比均降低约30%(Plt;0.05)。肾缺血预处理组及下肢缺血预处理组4、6、12 h HGF mRNA表达较急性心梗组各时间点降低(Plt;0.01)。结论 提示HGF可能是远距缺血预处理减少梗死区面积的机制之一。 【关键词】 急性心肌梗死;缺血预处理;肝细胞生长因子 1996年Gho等发现将小肠或肾脏缺血15 min对闭塞冠脉60 min的心肌有保护作用，可显著缩小心肌梗死的面积。他们把这种保护作用称为远端缺血预处理〔1〕。寻找远端缺血预处理过程中关键性的引起心肌保护作用的内源性物质可能对预防和 治疗 心肌梗死有重要的意义。肝细胞生长因子(Hepatocyte Groerase)购自美国Promega 公司;HGF 及βactin引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物模型的建立 采用大鼠心脏冠状动脉左前降支结扎法〔2〕制作心肌梗死模型：大鼠称重、麻醉后仰位固定，记录标准6导联心电图。气管插管，接小动物呼吸机。沿大鼠左侧第三、四肋间作一纵切口约1 cm，逐层打开胸壁，撕开心包，暴露心脏，在左心耳与肺动脉圆锥之间平左心耳下缘约3 cm处结扎冠状动脉左前降支，术毕逐层关胸。大鼠有自主呼吸后拔除气管内插管。以结扎线以下心肌颜色变暗及结扎冠脉20 min内心电图ST段、T波进行性抬高为成功结扎的指标。 　　1.2.2 实验分组 大鼠随机分为3组：①急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)组：结扎冠状动脉左前降支制作AMI模型;②肾脏缺血预适应(renal ischemic preconditioning，RIP)组：大鼠仰卧位,腹正中切口,游离肾蒂,分离双侧肾动脉，用无损伤动脉夹夹闭双侧肾动脉,夹闭5 min，开放5 min，共3个循环〔3〕。随后进行冠状动脉左前降支结扎复制AMI模型;③下肢缺血预处理 (limb ischemic preconditioning，LIP) 组：钝性分离双侧股动脉，用动脉夹夹闭双侧股动脉5 min，开放5 min〔4〕，共4个循环。随后进行结扎、复制AMI模型。④ 正常对照组：未作任何处理。除正常对照组外均在操作结束后2、4、6、12 h处死大鼠。保证每组成功实验动物例数为8例。 　　1.2.3 伊文思三苯基氯化四氮唑(evansTTC)双染色法测定梗死程度〔5〕 在结扎左冠状动脉12 h后，重新麻醉大鼠，固定，开胸，用止血钳钳夹升主动脉，由主动脉根部逆行注入1%伊文思蓝，正常心肌为蓝色，缺血区为苍白色。等缺血区明显后，将心脏取出，于生理盐水中冲洗，并剪去心房和右室，滤纸吸干表面水分，置-20℃冻存。0.5 h后取出，沿心肌横轴切5～6片，放入2%TTC中，37℃孵育30 min。可见存活心肌被染成蓝色，缺血心肌为砖红色，梗死心肌为苍白色。仔细分离以上三种心肌，用 电子 天平称重，分别进行记录。 计算 梗死心肌与缺血心肌和梗死心肌之和的重量百分比来表示梗死程度，同时计算缺血区心肌占左室心肌百分比来表示心肌缺血程度。 　　1.2.4 RTPCR法测心肌组织HGF基因表达 取各组大鼠结扎线下缺血区心肌100 mg，液氮中速冻，-80℃冰箱保存待用。Trizol一步法提取总RNA，反转录后行HGF和内参照βactin基因的PCR扩增。HGF引物序列：上游 5′gag cca gac gct agc aag tt3′，编号CI组相比其缺血程度无明显差异(Pgt;0.05);而RIP组心肌梗死程度(46.18%±6.15%)、LIP组梗死程度(46.92%±6.69%)较AMI组(66.44%±13.68%)相比均降低大约30%，降低有明显差异(Plt;0.05)。RIP组、LIP组梗死程度相比差异无统计学意义(Pgt;0.05)。