实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2含量.pptVIP

实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量 中山大学公共卫生学院 肖琴 一、实验目的 了解荧光分析法的基本原理； 了解荧光分光光度计的使用。 二、实验原理 维生素B2又称核黄素。 在紫外光照射下，维生素B2就会发出绿色的荧光。 当荧光物质溶液的浓度较低时( abc≤0.05 )，若入射光的强度不变，则物质发出的荧光强度F与其浓度C成正比： F = KC 采用标准曲线法进行定量： 配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测出它们的荧光强度，以横坐标表示浓度C，纵坐标为相对荧光强度ΔF（ΔF=F-F0），绘制出标准曲线。 若要测定未知溶液的浓度，则在相同条件下测出未知溶液的相对荧光强度ΔF，在标准曲线上就可以直接查出对应的未知液浓度Cx。 注：F0为空白溶液的荧光强度。 三、仪器及试剂 棱光F96荧光分光光度计，石英样品池（四面透光），25 ml比色管，一次性吸管，500 ml容量瓶，漏斗，滤纸等。 维生素B2标准溶液：10 ug/ml，贮存于棕色试剂瓶中；1% 醋酸溶液；样品维生素B2片。 四、实验条件 固定激发光波长λex为420 nm（即滤光片的波长），用1.0 mg/ml维生素B2标准溶液绘制荧光光谱，找出最大荧光波长λem作为测定波长。 五、实验步骤 扫描荧光光谱 波长范围： 400～700 nm 标准曲线的绘制 样品测定 六、注意事项 操作应该在避光的条件下进行。 样品池轻拿轻放，垂直放入，小心使用。 不要关闭电脑上的荧光仪联机软件。 七、结果记录 根据测定的样品相对荧光强度ΔF＝F－F0，从标准曲线上查出样品溶液对应的维生素B2的浓度Cx，并计算维生素B2片中B2的含量，计算公式如下： * * 维B2片 转入500 ml容量瓶 取一定量(体积为V)于25 ml比色管，定容摇匀 过滤 溶于少量 1% 醋酸 定容摇匀 蒸馏水洗涤 合并 *