舒林酸对胃癌细胞凋亡的调控作用.docVIP

　　舒林酸对胃癌细胞凋亡的调控作用 作者：于东红，周蕾，王萍，王启之，承泽农 【关键词】 舒林酸；胃癌细胞；细胞凋亡；环氧化酶2；凋亡相关基因 　　0 引言 流行病学 研究 发现，经常服用非甾体类抗炎药（NSAIDs）者，其结、直肠肿瘤的发病率下降将近50% [1]。动物实验研究表明NSAIDs对许多动物诱发性肿瘤如结肠癌、膀胱癌有明显的化学预防作用 [2，3]，临床上非甾体类抗炎药舒林酸可使家族性腺瘤性息肉病患者的肠道息肉消退 [1]。对于胃癌，这方面的研究较少，其作用机制也不清楚。本实验将舒林酸设置不同的作用浓度和作用时间，于人胃癌细胞株BGC-823共培养，观察舒林酸对胃癌细胞凋亡的调控作用，探讨其作用机制。 　　1 材料与 方法 将舒林酸作用于人胃癌BGC823细胞（购自 中国 科学 院上海细胞生物学研究所；舒林酸购自Sigma公司）。设置3个实验组，舒林酸浓度分别为0.6mmol/L、0.9mmol/L和1.2mmol/L，以不加药为对照组，作用时间分别为24、48、72h。 应用 流式细胞术、TUNE法检测胃癌细胞的凋亡率（200倍光镜下每张爬片随机计数1 000个细胞，每组4张涂片共计数4 000个细胞，计数其中的阳性细胞数， 计算 阳性率。阳性率＝阳性细胞数/4 000×100％）；透射电镜观察胃癌细胞超微结构改变；免疫组化SP法检测凋亡相关基因蛋白bcl2、survivin的表达以及环氧化酶2（COX2）蛋白的表达（鼠抗人COX2、bcl2、survivin单克隆抗体、免疫组织化学SP试剂盒、TUNEL试剂盒，均购自福州迈新生物技术开发有限公司）。 　　2 结果 　　2.1 流式细胞仪检出了凋亡峰（图略），该峰随着舒林酸作用浓度的增大而升高；随作用时间的延长而升高。经0.6mmol/L、0.9mmol/L、1.2mmol/L浓度舒林酸作用24h后，凋亡细胞分别占8.7%、20.1%和36.7%，而对照组仅为1.9%；作用48h后，凋亡细胞分别上升至19.8%、35.6%和54.9%，对照组为2.8%。各药物组与对照组比较有显著性差异（Plt;0.05），各药物组之间比较以及48h组与24h组比较也均有显著性差异（Plt;0.05）。 　　2.2 TUNEL法检测细胞凋亡率 　　 随着舒林酸浓度增大，细胞凋亡率增加。各实验组与对照组比较以及实验组之间比较均有显著性差异（Plt;0.05），而且TUNEL法检测的细胞凋亡率和流式细胞仪检测的细胞凋亡率均高于对照组，均具有统计学意义（Plt;0.05），见表1。表1 TUNEL检测BGC823细胞的凋亡率舒林酸浓度（略）注：*与0.6mmol/L组比较，Plt;0.05 　　2.3 透射电镜下，对照组BGC-823细胞体积较大，结构完整，核形规整、核膜清晰，染色质分布均匀。舒林酸作用组可见细胞皱缩、核质比例减小，核仁不清晰，染色质聚集于核膜下呈块状或新月状（图略），并见到细胞质膜包被的凋亡小体（图略）。 　　2.4 免疫组化检测凋亡相关基因蛋白bcl2、survivin表达和COX2蛋白表达，结果显示胃癌细胞的bcl2蛋白和survivin蛋白表达下降，COX2蛋白的表达阳性率也低于对照组，以上结果均呈时间和剂量依赖性(Plt;0.05)。 　　3 讨论 本实验 应用 FCM，在不同浓度舒林酸作用24、48h后，各实验组均检测到凋亡峰，且细胞凋亡率显著高于对照组（Plt;0.05）；TUNEL法检测实验组的细胞凋亡率也高于对照组（Plt;0.05）；透射电镜观察到舒林酸作用后的细胞出现了凋亡形态特征及凋亡小体；以上结果均提示舒林酸能诱导胃癌BGC823细胞凋亡，并有时间和剂量依赖性，其机制涉及抑制凋亡抑制基因bcl2、survivin蛋白的表达和抑制了COX2蛋白的表达。 【 参考