芪芍合剂对关节炎大鼠炎症及血管新生相关因子的影响.docVIP

　　芪芍合剂对关节炎大鼠炎症及血管新生相关因子的影响 作者：沈维干， 薛永骥， 张育， 孟德钎， 顾健 【摘要】 　　目的研究中药组方芪芍合剂对大鼠II 型胶原诱导型关节炎(CIA)炎症及血管新生相关因子的影响。方法用II 型胶原和完全弗氏佐剂建立CIA 模型，造模次日始用芪芍合剂(40 g·kg-1·d-1×4周)灌胃，模型对照组分别给予等量的生理盐水。于造模第4周大鼠心脏采血分离血清进行MP-2以及MMP-9的相对表达水平。结果中药可以降低大鼠IL-1β，TNF-α，VEGF ，MMP-2，MMP-9 的表达。结论IL-1β，TNFα，VEGF ，MMP-2，MMP-9 共同促进CIA 大鼠炎症的形成和 发展 ，中药可能通过抑制它们的表达而发挥抗炎及抗血管新生作用。 【关键词】 芪芍合剂 关节炎 II型胶原诱导型 血管新生 相关因子 大鼠 　　类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种常见的可致残的慢性炎症性疾病，与多种免疫失调密切相关。我国患病率为0.32%～0.36%。RA主要病理特点是在炎症刺激下，关节滑膜细胞增生，衬里层增厚，多种炎细胞浸润，滑膜细胞合成TNF-α，IL-1等多种细胞因子促进滑膜成纤维细胞增殖和微血管新生而形成血管翳，后者从滑膜边缘逐渐扩展覆盖于关节软骨表面，一方面中断了关节的营养，另一方面通过分泌一些酶导致软骨和骨质的破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。 　　本研究采用中药组方芪芍合剂 治疗 用Ⅱ 型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)构建CIA 大鼠模型，4周后用MP-2，MMP-9因子的水平。研究中药组方对RA 的炎症及血管新生相关因子影响。 　　 1 材料 　　1.1 药物芍合剂由桂枝芍药知母汤和黄芪桂枝五物汤加减组成：黄芪30 g，当归10 g，川芎10 g，白芍15 g，丹参15 g，桂枝10 g，知母10 g ，秦芎10 g，桃红10 g，牛膝10 g，白芥子10 g，甘草10 g等，水煎后浓缩至4 g·ml-1生药，4℃ 保存备用。 　　1.2 动物雌性近交系SD 大鼠，清洁级，4～6周龄，平均体重为（190±15）g，购于南京医科大学实验动物中心(合格证号：苏动质字第97001号)。 　　1.3 试剂Ⅱ型胶原(上海本草生物医学工程研究所产品)，卡介苗（BCG）(兰州生物制品所产品)，高、低分子量标准蛋白参照物(上海华舜生物工程有限公司产品)，TNFα，IL-1β，VEGF，MMP-2，MMP-9兔抗多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司产品），羊抗兔AP 多克隆抗体(工作浓度为1∶1 000) （武汉博士德生物工程有限公司产品）。 　　 2 方法 　　2.1 II型胶原的配制取液体石蜡8 ml 和羊毛脂4 ml混匀高压灭菌。加入卡介苗（BCG）120 mg，混匀。将II型胶原60 mg溶于12 ml 的0.01 M 乙酸中，浓度为5 mg·ml-1，4℃ 过夜，充分溶解，然后和完全弗氏佐剂（CFA）等体积混合，乳化，制成Ⅱ型胶原乳剂24 ml，每毫升含5 mg BCG和2.5 mg II 型胶原。 　　2.2 实验动物的分组取40只大鼠，随机分为4 组：A组：模型组； B组：模型+ 生理盐水组； C组：模型+中药组； D组：生理盐水造模对照组（正常对照组）。 　　2.3 动物模型的建立以每只0.1 ml的剂量在鼠的右后足跖皮内注射(II 型胶原每只0.25 mg)。21 d时以每只0.1ml的剂量尾根部皮内多点激发注射1次。对照组以生理盐水注射，方法同模型组。所有动物均在清洁环境中饲养。 　　2.4 中药治疗参照 　　3.2 MP-2和MMP-9的MP-2和MMP-9均有少量表达，在造模后5种因子的表达水平显著增加（A和B组），而中药 治疗 组（C）与CIA模型组（A）以及模型对照组（B）相比，血清中的TNFα，IL-1β，VEGF，MMP-2和MMP-9的水平显著降低。 　　半定量分析结果由表1可见，造模后，大鼠体内TNF-α，IL-1β，VEGF，MMP-2和MMP-9表达量（A组和B组）与非模型对照组比较有显著性差异（Plt;0.01）；而在中药治疗组，CIA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、VEGF、MMP-2和MMP-9均显著下调，与非治疗组模型大鼠比较均有显著性差异（Plt;0.01）。模型对照组（B组，生理盐水组）对模型大鼠上述5种因子的表达无明显影响，与模型组比较均无显著性差异（Pgt;0.05）。表1 血清TNFα，IL-1β，VEGF，MMP-2和 MMP-9相对含量（略） 　　 　　 4 讨论 　　RA是一种累及全身多关节的慢性炎症性疾病，其发病机制仍未完全阐明，我国的患病率及致残率均较高，严重威胁着