苯酚硫酸法测定鲜人参中多糖含量.docVIP

　　苯酚硫酸法测定鲜人参中多糖含量 作者：钟岩 潘浦群 王艳红 初丽伟 【摘要】 　　目的建立了测定鲜人参中多糖含量的分析方法。方法用苯酚硫酸法，在波长490 nm处测定吸光度，人参多糖在10～160 μg范围内具有良好的线性关系，相关系数为0.998 7。平均回收率为98.40%，RSD=2.53%。结果人参多糖的最佳提取条件为：料液比为1∶10，提取温度为100℃，提取时间为4 h，人参多糖换算因子为1.58，鲜人参中多糖的含量为18.14 g/100 g。结论该方法简便、准确率高、重现性好。 【关键词】 鲜人参 多糖 苯酚 硫酸法 含量 　　Abstract：ObjectiveTo established an analysis method for the determination of the content of polysaccharides from fresh root of Panax ginseng.MethodsThe method of phenolvitriol.The absorbency rate .ResultsThere um extraction condition of Ginseng polysaccharides ethod is simple,accurate and repeatable. 　　Key 处和一定浓度范围内，吸光度与糖浓度呈线性关系，采用比色法对鲜人参多糖含量进行测定。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　鲜人参；无水乙醇（AR）；95%乙醇（AR）；硫酸（AR）；苯酚（AR）；葡萄糖（AR）。植物粉碎机， 电子 天平，DU-7500紫外分光光度计（美国Backman公司），离心机，真空干燥器，恒温水浴，真空冷冻干燥机等。 　　1.2 鲜人参多糖的提取与精制新鲜的鲜人参，植物粉碎机粉碎后，称取适量样品，按浸提比1∶20，在100℃水浴中提取4 h，趁热用布氏漏斗抽滤，浓缩，加3倍体积95%乙醇醇沉，置冰箱24 h，离心20 min（5 000 r/min），沉淀用适量95%乙醇洗涤两遍，真空冷冻干燥，得人参粗多糖。 　　称取一定量人参粗多糖，制成粗多糖质量分数为1%的溶液，采用Sevage法除蛋白，量取水浸浓缩液的体积为V(ml)，向其加入1/5V的氯仿和1/25V的正丁醇，振荡20 min，3 000 r/min的转速下，离心15 min，合并上清液测其体积，继续加相应体积的氯仿和正丁醇，并重复上述操作，直至氯仿层与正丁醇层之间无白色沉淀。 　　将水浸浓缩液倒入下端扎好的截流分子量为6 000～8 000的半透膜袋中，将袋的另一端用绳扎好后，悬挂在盛有水的烧杯里，将烧杯放在磁力搅拌器上，开动搅拌，蒸馏水透析48 h，期间每2h更换一次水，经常更换清水使透析膜内溶液的浓度差加大，并加以搅拌，加快透析速度，除去无机盐、单糖、双糖等小分子杂质。加3倍体积95%乙醇醇沉。沉淀放入真空冷冻干燥机内，冷冻干燥48 h，获得白色固体粉末，干燥即得精制人参多糖。 　　1.2.1 样品溶液的制备 　　精密称取适量样品，分别置具塞三角瓶中，按一定料液比、浸提温度、浸提时间，在热水浴中浸提4 h，用布氏漏斗抽滤，浓缩，浓缩后加3倍体积95%乙醇溶液，静置24 h后，离心，沉淀用蒸馏水溶解，定容至250 ml，即为待测样液。 　　1.2.2 标准曲线的制备 　　精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品1 g，置于100 ml容量瓶中，溶解并稀释至刻度，配成10 mg/ml的标准贮备液，吸上述贮备液1 ml定容至100 ml，配成0.1 mg/ml的工作液。精密移取葡萄糖标准液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6 ml于25 ml具塞刻度试管中，加蒸馏水至2.0 ml，再各加5%苯酚溶液1.0 ml摇匀，迅速加入浓H2SO4溶液5 ml，振摇5 min，放置10 min，置沸水浴中加热20 min，取出冷却至室温，于490 nm，以试剂空白为参比测定吸光度。 　　1.2.3 换算因子的测定精密称取干燥至恒重的精致人参多糖5.0 mg［6,7］，加蒸馏水溶解，转移至25 ml容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀得人参多糖储备液；吸取多糖储备液2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，加水定容；吸取上述溶液2.0 ml，按标准曲线的绘制方法测定吸光度，同时做空白对照；由回归方程求出此人参多糖储备液中葡萄糖的浓度，并 计算 其中葡萄糖含量。按下式计算换算因子f：f=m/(c×D×V)，式中m为人参多糖的质量（mg），c为人参多糖储备液中葡萄糖浓度（mg/L），D为人参多糖的稀释倍数，V为体积（ml），测得f=1.58(n=7)。