蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3增殖的影响.docVIP

　　蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC|3增殖的影响 【摘要】 目的观察蝙蝠葛酚性碱（PAMD）在体外的广谱抗肿瘤作用。 方法 采用MTT比色法测定不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理白血病细胞株(K562)、人胰腺癌细胞株(BXPC|3）24 h的存活率，同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90。实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组。结果不同质量浓度蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC|3细胞株的细胞增殖具有抑制作用，抑制作用均与质量浓度呈梯度关系。结论蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用，揭示其具有细胞毒效应，蝙蝠葛酚性碱产生抗肿瘤生物学效应的机理有待进一步 研究 。 【关键词】 蝙蝠葛酚性碱 人肿瘤细胞株 MTT比色法 细胞毒 蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids of menispermum dauricum,PAMD)是从中药蝙蝠葛(Menispermum dauricum,DC)根茎中提取的多种脂溶性生物碱的混合物,实验已证明其主要成分为蝙蝠葛碱(dauricine，Dau)和蝙蝠葛苏林碱(daurisoline，Ds)，Dau和Ds均为双苄基异喹啉类生物碱，脂溶性高，具有抗钙活性。PAMD具有较好的抗心律失常以及保护脑缺血—再灌注损伤作用, 且副作用小, 已作为 治疗 心脑血管疾病的新药供临床使用[1-3]。但关于PAMD抗肿瘤的作用未见报道，因此我们采用体外培养的方法研究PAMD的抗肿瘤活性，并对药物的敏感瘤株进行筛选。 1 材料与方法 1.1 细胞和细胞培养 人白血病细胞株（K562）、人胰腺癌细胞株（BXPC|3）由中科院上海生物细胞所引进。体外细胞培养于含10 %小牛血清以及100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的1640培养液中，37 ℃,5 %CO2培养箱内培养，细胞长至对数生长期用于实验。 1.2 实验药品 蝙蝠葛酚性碱由药学院王栋教授提供。实验时用生理盐水配制成0.625，1.25，2.5，5，10，20， 40 μg/mL质量浓度的混悬液，用0.22 μm微孔过滤除菌，置-20 ℃冰箱保存备用。氟尿嘧啶注射液（2.5 g/mL），天津金耀氨基酸有限公司，批号： 1.3 试剂和仪器 RPMI1640购自Gibco公司，以10.4 g溶于1 000 ｍＬ三蒸水中，用NaHCO3调pH值到7.0，过滤除菌，4 ℃冰箱保存。胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司,经56 ℃、30 min灭活处理后，置-20 ℃冰箱保存备用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）和二甲亚砜（DMSO）均购自sigma公司。DG5031型酶联免疫仪为华东 电子 管厂产品。 1.4 MTT法筛选蝙蝠葛酚性碱的抗癌瘤谱[4] 取对数生长期的K562、BXPC|3细胞株,配制成1×107/mL单细胞悬液，接种于96孔培养板,每孔0.1 mL,实验组分别加入蝙蝠葛酚性碱至终质量浓度为40，20，10，5，2.5，1.25，0.625 mg/L，每个药物质量浓度设6个复孔，空白对照组不加药，置于37 ℃饱和湿度5 ％CO2条件下常规培养24 h，每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)，再置培养箱内继续培养4 h。吸取上清液，每孔加入100 μL DMSO振荡5 min，用酶联仪在570 nm波长下测定各孔光吸收值(OD值)，记录结果。细胞抑制率 计算 公式为： 细胞抑制率=(空白对照组OD均值-药物组OD均值)/空白对照组OD均值×100 %。 按下列公式计算肿瘤细胞的存活率，判断蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞的敏感性（肿瘤细胞的存活率＜30 %为高度敏感，30 %～50 %为中度敏感，＞50 %为不敏感）,同时计算IC50和IC90，实验在相同条件下重复3次。 细胞存活率=实验组光吸收值/空白对照组光吸收值×100 % 1.5 统计学处理 实验数据以(±s)表示，采用t检验比较各组的OD值，采用线性回归计算IC50和IC90。 2 实验结果 2.1 蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞的增殖抑制作用 不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱处理BXPC|3、K562细胞株24 h后，对BXPC|3、K562细胞株的抑制率随着质量浓度的增加而增大；实验组各剂量组与阳性对照组比较，质量浓度为40，20，10，5，2.5 μg/mL时，对BXPC|3细胞株的抑制率显著高于5|FU(P＜0.01)，质量浓度为40，20，10 μg/mL时，对K562细胞株的抑制率显著高于5|FU(P＜0.01)。表明蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞的增殖具有良好的抑制作用。见表 1。 表1PAMD对人肿瘤细胞株的 影响 注：与空白对照组比较*P＜0.01，**P＜