转化生长因子β3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用.docVIP

　　转化生长因子β3在子宫肌瘤组织中的表达和消癥煎膏的干预作用 作者：蒋秋燕 唐厚秀 蒋桂秀 苏莉鸣, 唐乾利 【摘要】 　　目的研究消癥煎膏对大鼠子宫肌瘤以及子宫肌瘤中TGF-β3的影响。方法造模大鼠60只，随机分成5组，每组12只：实验组消癥煎膏分高、中、低3个剂量组，直肠给药；中桂组，予桂枝茯苓胶囊溶液灌服，每次0.5 ml/kg；模型组。另设空白组12只，每天灌服0.9%生理盐水，0.5 ml/kg/次，以上各组均给药3次/d，共4周。停药后第1天内处死大鼠，立即取标本实验研究。结果 治疗 组大鼠子宫重量明显减轻，宫颈和宫体处最大直径显著缩小，与模型组比治疗组子宫系数降低明显；实验组3个剂量的TGF-β3水平与模型组比较Plt;0.05，有显著意义；中桂组与模型组比较，Plt;0.05；模型组与空白组比较，Plt;0.01，有非常显著意义。结论消癥煎膏能使子宫肌瘤缩小，明显降低TGF-β3表达，抑制子宫肌瘤细胞增殖，使肌瘤缩小，因此推测其内可能含有TGF-β抗体类物质在起作用。 【关键词】 消癥煎膏 直肠给药 子宫肌瘤 转化生长因子-β3 　　子宫肌瘤（UL）是女性生殖系统最常见的良性肿瘤，主要由子宫平滑肌细胞增生而成，其间有少量纤维结缔组织［1］。分子生物学研究显示UL的发生与众多生长因子及细胞因子有关，这些因子以自分泌或旁分泌方式促进子宫平滑肌细胞增殖，形成一个复杂的因子 网络 ，在UL中这些生长因子源于平滑肌细胞，又作用于平滑肌细胞促进其增殖。在子宫肌瘤培养细胞中分别加入相等质量浓度的TGF-β1与TGF-β3,结果均发现培养细胞中纤维结合蛋白mRNA的水平上升,而加入TGF-β3上升更明显。Arici等［2］也研究证实在子宫肌瘤和肌层细胞中加入TGF中和抗体1型和3型胶原蛋白mRNA显著下降。因此，抗TGF物质可以抑制子宫肌瘤生长，TGF-β抗体是一种可能用于治疗子宫肌瘤的新药。中医中药在降低生长因子、细胞因子表达方面有着非常明显的效果。如何寻找一种更为有效的中草药，抑制或降低UL中生长因子的表达，正是本实验的主要目的。 　　 1 器材 　　1.1 对象两个月龄左右雌性大鼠Sprague Dag/ml）,上海通用药业股份有限公司产品，批黄体酮注射液（20 mg/ml）,上海通用药业股份有限公司产品,批号050901。桂枝茯苓胶囊(0.31 g/粒)，江苏康缘药业股份有限公司产品，批号200609；兔抗人多克隆TGF-β3及SABC即用型试剂盒均购自上海蓝创生物科技 发展 有限公司产品，批号050102。 　　1.3 仪器石蜡切片机（英国），Olympus 生物显微照相系统（日本），Siemens DME2冰箱（德国），Cmias-2000真彩色病理图像分析系统软件(北京麦克奥迪公司)， 电子 秤 JD1000-2(沈阳龙腾电子称量有限公司)。 　　 2 方法 　　2.1 复制大鼠UL模型本实验参照 　　操作流程：脱蜡、水化——PBS洗两次各5 min——用PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭10 min，蒸馏水洗3次——抗原修复——PBS洗5 min——滴加10%正常羊血清封闭液，室温20 min。甩去多余液体——滴加Ⅰ抗, 37℃1 h（4℃过夜后再37℃复温45 min）——PBS洗3次，2 min/次——滴加生物素化二抗，20～37℃，20 min——PBC洗3次，2 min/次——滴加试剂SABC，20～37℃，20 min-PBS洗4次，5 min/次：自配显色剂显色（为了方便镜下掌握显色程度——蒸馏水洗,苏木素复染2 min，盐酸酒精分化——100%乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片、镜检。　　2.4 结果判定 　　用组织评分(II-score)法［6］，以胞浆或胞膜出现着色为阳性标记。i代表染色深浅，共0～3分：0分，未出现染色；1分，胞浆胞膜呈淡红色或红褐色；2分，红色；3分，深红色或红黑色。Pi代表每一着色程度的细胞所占比例，为（0～100）%。H-score=∑Pi(i+1)，满分为4分。每个切片选择4个视野，每个视野测定3次后取平均值，由同一人使用同一台仪器测定。 　　2.5 统计学处理所有结果采用SPSS11.5软件包进行处理，用±s进行描述，组间及组内比较采用单因素方差分析里面的多重组间比较。 　　 3 结果 　　3.1 一般观察结果造模期间大鼠精神状态欠佳，皮毛色泽稍干涩，毛易脱落，饮食比造模前有减少，对外界刺激呈防守状态，攻击性强，休息时易惊，粪便一般较黏稠，偶有少许淡红色分泌物附着，味腥臭。体重增加约40～65 g。 　　实验后，大鼠精神状态逐步好转，皮毛色泽稍光滑，毛发脱落有改善，饮食增加，对外界刺激呈防守状态，攻击性减低