实时定量大肠癌组织中MK基因表达及其临床意义.docVIP

　　实时定量大肠癌组织中MK基因表达及其临床意义 作者：李克强 陈功星 张佳炜 曹树立 胡锡浩 【摘要】 目的 利用实时定量PCR（Realtime Quantitative Polymerase Chain Reaction, RT-PCR）相对定量大肠癌组织中Midkine(MK)基因的表达，探讨MK基因在大肠癌不同病理状态中的意义。方法 提取34例临床大肠癌组织及其癌旁正常组织中的总RNA，经寡聚脱氧胸腺嘧啶逆转录，RT-PCR扩增，以内标甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）基因的mRNA相对定量MK基因的mRNA表达，比较癌组织与其癌旁正常组织中的MK表达差异。结果 34例样本中癌组织较之癌旁正常组织，MK基因表达降低（P＜0.01）；其中在Ducks分期中C期、女性组、淋巴结转移、管状腺癌和浸润浆膜层组中癌组织较之癌旁正常组织表达降低（P＜0.05），其余组大肠癌组织较之癌旁正常组织无统计学意义（P＞0.05）。结论 在大肠癌病程晚期癌组织中MK基因的表达水平降低。 【关键词】 实时定量 PCR Midkine基因 【Abstract】 Objective idkine (MK) gene expression ples. K expression and colorectal cancer. Methods The total RNA 34 clinical samples of colorectal cancerous tissue and thEir adjacent normal tissue. The RNA plified by RT-PCR. MK relative expression al tissue. Result In the 34 samples MK mRNA of the colorectal cancerous tissue is less than that of the adjacent normal tissue (P＜0.01). And the same situation is MK mRNA in the14 C-phase samples, the female, the transferred lymphaden, the tubular adenocarcinoma and the invasive subserous groups (P＜0.05). But there is no statistical signification （P＞0.05）in the other groups. Conclusion MK expresses loe Quantitative PCR Midkine gene 大肠癌在我国近几年发病率上升，5年生存率在60％左右，但 治疗 效果30年来无显著提高［1］。大肠癌发生机制相对于其它肿瘤的发生机制来说较为清楚，但仍有很多问题尚未解决，特别是早期发生阶段的机制还不清楚,应用基因分析手段检测相关基因的异常变化有可能在早期诊断和预后判断上发挥作用［2］。Midkine（MK）基因是日本学者Kadomatsu等［3］运用差异杂交的方法，从视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤HM-1细胞株cDNA文库中筛选出的一个新基因，在多种肿瘤患者血清中高表达［4］，尤其是在肝癌组织中的表达，肝癌组织恶化时表达增加，肝癌组织恶性程度低时表达少［5］，此外，MK基因在早期大肠癌变组织中也是表达升高的［6］，但晚期的表达未见报道，作者自2006年5月至2007年12月利用实时定量PCR（RT-PCR）技术，对临床大肠癌样本进行分析，观察MK基因在大肠癌组织及其癌旁正常组织中的表达情况，进一步探讨MK基因表达mRNA水平与大肠癌病理过程的关系。 1 材料和方法 1.1 样本的采集 34例大肠癌及其癌旁正常组织标本随机取自浙江大学医学院附属第二 医院 肿瘤外科、普通外科手术患者，其中男17例，女17例；年龄25～84岁，平均62.1岁，经病理检查确定。 1.2 试剂和仪器 引物设计为跨目的基因内含子、含两个外显子部分碱基的序列，并经blastn基因库搜索，符合引物常规设计要求，荧光素标记为PCR仪器所要求：MK基因上游引物：5-GCGCGCTACAATGCTCAGT-3，下游引物：5- CCCTTCCCTTTCTTGGCTTT-3，探针：5-FAM CCAGGAGACCATCCGCGTCACC TRMAR-3（上海生物工程公司合成），含甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因上、下游引物和VIC标记探针的20×Human GAPDH、2×PCR master mix、dNTPs购于PE公司。Trizol、5×Strand buffe