《DNA的粗提取和鉴定》实验中的几个常.docVIP

《DNA的粗提取和鉴定》实验中的两个常见问题 陶晓东（江苏省常州市武进高级中学生物组 213161） 摘要：中学实验中提取DNA的实验材料的选择问题，几种实验材料各自的优缺点；DNA鉴定过程中易出现的一些常见问题及具体的解决方案。 关键词：鸡血细胞DNA提取液 二苯胺试剂 人教版高中生物教材第二册（必修）中的实验十一《DNA的粗提取和鉴定》是一个比较重要的学生实验。该实验比较复杂，在实际操作过程中需要注意的细节问题也非常多，而且往往因为某个环节的操作不当，结果不能观察到明显的实验现象。因此，有必要对实验过程中应当注意的问题做一些探讨。从我个人和学生的实际实验操作过程中，我认为有以下两个问题值得注意。 实验材料的选择问题： 虽然各种生物细胞中都含有大量的DNA，但是并不是每一种生物组织都适合做提取DNA的原材料。比较好的实验材料最好应该满足以下几个条件 组织中DNA的含量比较丰富,能够适合大量提取。 该组织中所含化合物种类应比较单纯,避免由于其他物质化学性质与DNA相近，从而对实验现象产生某些干扰。 实验材料的价格适宜，从而能相对的降低实验成本。 实验材料在实验过程中的可操作性较强，在相对简单的条件下能大量提取出DNA，便于学生实验操作。 可用于提取DNA的实验材料很多，人教版高中生物第二册教师教学用书中提供了两类可用于提取DNA的实验材料：鸡血和植物组织（新鲜菜花、蒜黄、菠菜等）；另外在《实验教学与仪器》杂志2002年第一期的《探讨“DNA的粗提取与鉴定”的实验改进》一文中提供了另一种可行的实验材料：鱼类的精巢；此外，在高教出版社《生化实验方法和技术》一书中还介绍了一种从动物胸腺中提取DNA的方法，这是一种大学教材上提供的方法。这几种实验材料由于各自性质的差异，实验的操作过程和步骤有很大的差别，以下是四种实验材料特点的粗略比较。 实验成本 DNA含量 特殊药品 配置 实验仪器 配置 实验效果 鸡血细胞 取材易，价格较低 丰富 柠檬酸钠 离心机 可操作性强，实验效果明显 植物组织 易取材，价格较低 较丰富 SDS EDTA 三羟甲基氨基甲烷 常规 实验成功率较低，实验效果与研磨液关系密切 ， 鱼类精巢 取材易，价格较低 丰富 无 组织捣碎机 可操作性强，效果明显，但不易定量控制 动物胸腺 取材不易，价格高 丰富 柠檬酸钠 离心机 组织捣碎机 可操作性较强，适宜做定量分析 注：SDS：十二烷基磺酸钠 EDTA：乙二胺四乙酸二钠 根据以上对比可以看出,如果从取材方面来考虑的话,以动物胸腺组织作为实验材料是不经济的,而且还要面临中学实验条件的限制等问题。我没有具体完成过该实验，如果有兴趣的话，该实验的实验方法可查阅相关资料。 使用其余三种物质作为实验材料，学生的操作过程大同小异，具体数据可能会有一定的差别，以下是三种不同方法步骤的比较 鸡血细胞 植物组织 鱼类精巢 配质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。 将血液倒入离心管中,在1000r/min的转速下离心2~3分钟,弃上部澄清液 取离心管底部的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 将10%的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，此时DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。为减少DNA的损失，可省略教材上要求的用纱布过滤这一步骤。 将析出的DNA再溶解于20ml10%的氯化钠溶液中。 在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml10%氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加入相同的量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。 取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天 取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入10ml研磨液,充分研磨10分钟 将研磨液置于离心管中，在1000r/min的转速下离心2~3分钟，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟 取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。 DNA的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步骤6、7，具体数据有一定的差异。 鉴定（略） １．取成年雄性鲤鱼1条，取出精巢10克，用组织捣碎机捣碎成糜 ２．组织糜溶于500ml10%Na