山羊KLF13基因的克隆及表达分析_朱江江.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2017, 25(1): 102~109 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2017.01.012 山羊KLF13基因的克隆及表达分析 1 2* 1，2 1，2 1，2 3 3 朱江江 林亚秋 王永 李倩 林森 熊朝瑞 俄木曲者 1 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室，成都610041；2 西南民族大学生命科学与技术学院，成都610041；3 四川省畜牧 科学研究院，成都610066 *通讯作者，linyq 1999@163.com 摘 要 Krüppel 样因子(Krüppel-like factors, KLFs)是一组与真核基因转录调控密切相关的锌指蛋白。 本研究旨在克隆山羊(Caprahircus) KLF13基因的CDS 区序列，检测其在山羊不同组织中表达水平，并鉴 定在细胞分化过程中的表达规律。随机选取24 月龄的健康简州大耳羊公羊4 只，屠宰后分别采集心、肝、 脾、肺、肾、皮下脂肪、背最长肌、股二头肌和臂三头肌组织样品，提取组织总RNA ，利用RT-PCR 法克隆山 羊KLF13基因序列，并进行生物信息学分析；利用实时定量PCR 法检测KLF13mRNA 的表达水平，并检 测前体脂肪细胞(0、3、5、7 d)和成肌细胞(0、2 、3、4 、5 d)诱导分化后的KLF13mRNA 表达水平。结果显 示，克隆得到KLF13cDNA 序列长991 bp (GenBank 登陆号: KU041755) ，其中包含CDS 区876 bp ，5UTR 序列12 bp ，3UTR 序列103 bp ，编码292 个氨基酸残基。山羊KLF13基因编码的氨基酸序列与绵羊(Ovis aries) 、牛(Bostaurus) 、猪(Susscrofa) 、小鼠(Musmusculus) 的相似性分别为100%、97.9%、96.6%和90.8% 。山 羊KLF13基因与绵羊具有最近的亲缘关系，其次为牛、人(Homosapiens) 、猪和小鼠。KLF13mRNA 在山羊 脾和肺中具有最高的表达水平，而在肌肉中的表达丰度较低。在前体脂肪细胞的分化过程中KLF13 mRNA 表达水平逐渐降低，而在成肌细胞分化过程中则逐渐上升(除5 d 外) 。结果提示，KLF13基因可能 在调控山羊前体脂肪细胞分化过程中具有重要作用。本实验为研究KLF13基因在山羊前体脂肪细胞分 化中的作用提供了基础资料。 关键词 山羊，KLF 13，克隆，基因表达，前体脂肪细胞 中图分类号 S827 文献标识码 A Cloning and Expression Analysis of Goat (Caprahircus) KLF13Gene ZHU Jiang-Jiang1 LIN Ya-Qiu2* WANG Yong1, 2 LI Qian1, 2 LIN Sen1, 2 XIONG Chao-Rui3 EMU Qu-Zhe3 1 Key Laboratory of Sichuan Province for Qinghai-Tibetan Plateau Animal Genetic Resources Reservation and Exploitation, Chengdu 610041, China; 2 College of Life Science and Technology, Southwest University for Nationality, Chengdu 610041, China; 3 Sichuan Animal Science Academy, Chengdu 610066, China * Corresponding author, linyq1999@163.com Abstracts Krüppel- like factors (KLFs) is a group of zinc fing