两种Ames试验方法在蒲葵子提取物致突变试验中灵敏度的研究.docVIP

　　两种Ames试验方法在蒲葵子提取物致突变试验中灵敏度的研究 【摘要】 目的通过Ames试验与彷徨试验对蒲葵子正丁醇提取物的致突变试验结果，比较两种试验的灵敏度。方法对蒲葵子用正丁醇浸提，用Ames试验方法（掺入法）与彷徨试验方法，对TA100鼠伤寒沙门氏菌株进行致突变试验。结果两种试验方法结果显示，蒲葵子正丁醇提取物在5～500 μg/ml剂量范围，以Ames试验方法与彷徨试验均检测出阳性结果，而在0.025 μg/ml 与0.5 μg/ml 剂量下，彷徨试验能检测出阳性结果，而Ames方法未检测出阳性结果。结论在较低浓度时，彷徨试验能检测出Ames试验检测不出的阳性结果，表明彷徨试验灵敏度较Ames试验高。 【关键词】 正丁醇提取物；Ames；彷徨试验；灵敏度 　　Abstract：ObjectiveTo pare the sensitivity of the Fluctuation test and Ames test for examination of the sudden change caused by Chinese fan-palm sub-normal butyl alcohol extraction.MethodsChinese fan-palm al butyl alcohol, and Ames test and Fluctuation test ouse salmonella typhimurium.ResultsThe results demonstrated that the extract in the range of 5～500 μg/ml，the Ames test method and the fluctuation test method detected the positive result, and in the range of 0.025～0.5 μg/ml, the Fluctuation test could examine positive result, but the Ames test could not change. ConclusionIn loine positive result but Ames test can not, es test. 　　Key al butyl alcohol extraction; Ames; Fluctuation test; Sensitivity 　　鼠伤寒沙门氏菌／哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验），是利用一组组氨酸营养缺陷型菌株加入待测物在有或没有微粒体活化系统条件下，发生回复突变的特征鉴定化学物质的诱变活性，现已成为初步筛选化学物潜在致突变的首选方法。彷徨试验也是一种细菌回复突变试验，根据营养缺陷型菌株与受试化学物温育后在缺乏相应营养物的培养液中的生长情况判断所试化学物的诱变活性，节省试验材料(辅酶Ⅰ其需Ames平板掺入法用量的20%)。实验结果表明，Ames试验结果与动物致突变性有90%的相符率，而彷徨试验对于弱的、具有细胞毒性和低浓度的诱变／致突变物的检测有其优超性。因此这些方法是较好的化学物质诱变活性评价的试验方法。 　 　1 材料 　　1.1 受试药物 　　蒲葵子正丁醇提取物：蒲葵子分别用95%乙醇回流提取，浓缩成浸膏后，用正丁醇反复浸提，得到提取物的浓缩部分(以下简称蒲葵子提取物)。 　　1.2 实验菌株鼠伤寒沙门氏菌变异株组氨酸缺陷型TA100(由美国SIGMA公司提供)，经鉴定为合格菌株，置于平板备用。 　　1.3 阳性对照物① 2-氨基芴，美国SIGMA公司；②叠氮钠，美国SIGMA公司。 　　1.4 Ames试验培养液按 　　 3 结果 　　3.1 Ames试验凡致突变率(MR=受试物平均回变菌落数／阴性对照回变菌落数)大于或等于2，有剂量反应关系并有重复性的受试物为诱变阳性［4］，结果见表1。由表1可见蒲葵子提取物对TA100(+S9／-S9)在5～500 μg/ml剂量范围内表现出诱变阳性。进一步分析见表2，可以看出随着两种化合物浓度的增加，致突变率均相应增高，经统计学处理，证明浓度与致突变率间呈直线相关，表明蒲葵子提取物有一定的诱变活性。表1 蒲葵子提取物Ames试验结果受试物浓度（略）表2 Ames试验阳性结果剂量-反应关系比较（略） 　　3.2 仿徨试验结果按公式X2=2n（t-c）2 /（t+c）（2n-t-c）(n为50支试管数，t为实验组变色管数，c为对照组变色管数)，求P值，当Plt;0.05时，判断为致突变阳性。由表3可以看出在Ames试验中蒲葵子提取物在剂量为0.025，0.5 μg/ml时不显示诱变活性，在彷徨试验中对TA100在加S9时