实验三Feulgen反应显示DNA2009–3.pptVIP

实验三Feulgen反应显示DNA 一、实验目的 1．掌握临时制片法。 2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。 3．观察细胞中DNA的分布 二、实验原理 DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出游离的醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。该产物能特异地吸收550~570nm的光波。并且在一定的浓度范围内对550~570nm光波的吸收值与DNA含量成正比关系，符合化学计量学关系。 对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明此反应的专一性。 此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。 1950年，Swift H.应用Feulgen显微分光光度法，测定了一些生物各种组织中单个细胞的DNA含量，定义为C值。 Feulgen反应对DNA染色稳定、颜色鲜明、能定量，因此在细胞化学和组织化学中成为一个既古老、传统又经久不衰的DNA标记方法。 三、实验器具与药品 l? 每一个学生 复式显微镜（带油浸物镜）（microscope） l 每一组学生 擦镜纸；记号笔；小片滤纸；载玻片；镊子；移液枪 四膜虫培养液（200μl）； 大染色缸：Carnoy固定液；S