中草药清除超氧自由基的极谱法研究.docVIP

　　中草药清除超氧自由基的极谱法研究 作者：陈立新， 谢治民， 谭年元 【摘要】 比较了几种自氧化体系产生超氧自由基的效果，选定邻苯三酚自氧化体系产生超氧自由基，用单扫描示波极谱法扫描，研究8种中草药对超氧自由基的清除作用。 【关键词】 中草药; 单扫描示波极谱法; 超氧自由基; 清除作用 　　Abstract:The effects of producing the superoxide free radicals by the several of oxidation system have been studied. The pyrogallol acid ine the scavenging superoxide free radical activity against of Eight Chinese drugs. 　　Key mol/L邻苯三酚溶液、1 mg/ml亚甲基兰溶液、3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液、0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液、pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液。 　　在25.0 ml的0.2 mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml的0.1 mol/L盐酸，稀释至100 ml，得到pH=9.0的缓冲溶液。取10.0 ml为底液，加入1.0 ml的0.2 mmol/L邻苯三酚溶液，再加2.00 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0 ml的3.5 mg/ml二甲基亚砜溶液，再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液，加入1.0 ml的1 mg/ml亚甲基兰溶液，再加2.0 ml蒸馏水。采用线性扫描法记录二阶导数极谱波。 　　2.1.2 结果讨论在pH=9.0的HC1-Tris缓冲溶液中，邻苯三酚可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，在-0.676 V处有一还原峰，此峰为检测对象，它先逐渐增高，到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间的变化如图所示。此峰在4.0 min处最高，且变化较小，记录该峰在此时间点的峰高值作为空白对照读数。 　　在pH=9.0的NH3-NH4Cl缓冲溶液中，二甲基亚砜和亚甲基兰均可发生自氧化反应产生超氧自由基阴离子，两者分别在-0.700 V、-0.682 V处有一还原峰，峰形均它先逐渐增高，到一定时间后又缓慢降低。峰高随时间的变化如图1所示。二甲基亚砜在4.0 min处最高，且变化较小;亚甲基兰在3.0 min处最高，且变化较小。分别取此峰高最大处的时间点作为分析点，记录峰高值作为空白对照读数。 　　图1 邻苯三酚、二甲基亚砜、亚甲基兰的峰电流随时间的关系 　　图1中3条曲线从上到下分别为邻苯三酚、二甲基亚砜、亚甲基兰的峰电流和时间的关系，邻苯三酚、二甲基亚砜、亚甲基兰3种试剂在碱性条件下，在-0.68 V左右均能产生超氧自由基，但邻苯三酚产生超氧自由基的效果比另外两种试剂的效果要好的多。因此在测定8种中草药清除超氧自由基作用的实验中，产生超氧自由基采用邻苯三酚自氧化法。 　　2.2 当归等4种中草药清除超氧自由基的研究 　　2.2.1 实验方法将中药粉碎，每种各称取5 g，以1∶1的甲醇-水为溶剂，在回流装置中回流3 h左右，将溶液过滤，滤渣再回流2次，几次回流滤液合并、定容，得8种中草药提取液，储于冰箱备用。以每毫升提取液相当于每毫克生药量为浓度单位，将8种中草药提取液各自稀释为0.010，0.025，0.050，0.075，0.100 mg/ml 5种浓度的溶液。 　　在25.0 ml 0.2 mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml 0.1 mol/L的盐酸，稀释至100 ml，得到pH=9.0的缓冲溶液。取10.0 ml为底液，加入1.0 ml 0.2 mmol/L邻苯三酚溶液。 　　于相同的HC1-Tris底液中分别加入8种中草药不同浓度的溶液0.20，0.50，1.00，1.50，2.00 ml，观察其对极谱峰电流的抑制作用，采用线性扫描法记录二阶导数极谱波，扫描电位范围为-0.2～-1.4 V。在=-0.68 V处，读取4.0 min时的峰高，平行测定3次取平均值。 　　根据公式求抑制百分率：I(%)=(i0-i)/i×100% 　　I0为空白对照峰电流读数，i为样品峰电流读数。求出8种中草药不同浓度溶液对超氧自由基的抑制率，以抑制率为50%时的相应浓度(IC50)来表示各种中药的清除超氧自由基的能力。 　　2.2.2 结果讨论酸度对邻苯三酚氧化能力的影响：在酸性条件下，邻苯三酚是很稳定的，而当pH大于7.9以后，邻苯三酚能迅速氧化，随着pH的增大