五柴颗粒中五味子甲素的小鼠血清药动学研究.docVIP

　　五柴颗粒中五味子甲素的小鼠血清药动学研究 作者：郭庆英 王振华 张长水 陈扬 张兆强 【摘要】 目的研究五柴颗粒中五味子在小鼠体内药物代谢 规律 。方法小鼠灌胃给予五柴颗粒2 g/kg，在不同的时间点采血样，用高效液相色谱（HPLC）方法分析五柴颗粒和血清样品中五味子甲素成分，测定五味子甲素浓度的经时变化，绘制浓度-时间曲线图。结果五柴颗粒中五味子的主要成分是五味子甲素,其平均含量为3.13 mg/g ；小鼠给予五柴颗粒后，血清中检测到五味子甲素含量在5，10，20，30 min分别为1.07，1.14，0.59，0.51 μg/ml。结论五柴颗粒中五味子可吸收进入体内，其在体内吸收和消除速度均比较快，符合线性动力学规律。 【关键词】 五柴颗粒； 五味子； 药物动力学； 高效液相色谱法 Abstract：Objective To study pharmacokiics of schizandrinin in ethodsAfter oral administration of ADZU VP-ODS C18 (150 mm ×4.6 mm，5 μm )；流动相为超声脱气15 min的甲醇；流速1 ml/min ；柱温40℃ ；检测波长250 nm。 2.2 标准溶液的配制 用电子分析天平准确称量干燥的五味子甲素标准品5.0 mg，用甲醇定容至10 ml。此时所得标准品溶液浓度为500 μg/ml，将此浓度标准品规定为1号标准品，然后对1号倍稀得`2号标准品，用同样的方法分别得到3，4，5，6，7，8号标准品。 2.3 样本的处理 2.3.1 五柴颗粒中五味子甲素的含量测定 精确称取5 g五柴颗粒溶于50 ml双蒸水，经超声混匀配成100 mg/ml的溶液按上述色谱条件进行分析，测定五柴颗粒中五味子甲素含量。 2.3.2 空白血清和含药血清的制备取昆明种小鼠10只，其中两只作为空白血清组，其余作为含药血清组。含药血清组按照0.2 ml/10 g体重分别给8只小鼠灌胃五柴颗粒100 mg/ml的混悬液，于5，10，20，30 min分别给两只小鼠摘眼球取血；空白血清组以同样方法取血。5组血样立即12 000 r/min离心15 min（4℃），用微量移液器分别取0.2 ml上清液加入空离心管中，并分别加入0.4ml甲醇12 000 r/min离心15 min，再将上清液转移到空离心管中，加入0.4 ml甲醇，于12 000 r/min离心15 min，上清液转移至空的离心管中，80℃水浴至干，用甲醇定容至100 μl，即分别为空白血清组和含药血清组。 2.4 色谱行为 分别取不同浓度的标准品和处理后的五柴颗粒和小鼠血清样品20 μl，按以上色谱条件分别进样，绘制色谱图，在该色谱条件下，五味子甲素的保留时间为2.69 min，在该处，该峰独立，并且与其他物质无干扰。见图1～3。 2.5 线性关系考察分别精密吸取五味子甲素对照品溶液20 μl的,按上述色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明五味子甲素回归方程为Y=2.125X ,r2=0.996 265，五味子甲素在3.9 ～500 μg/ml范围内呈良好线性关系,RSD=8.298%。结果见表1。表1 五味子甲素对照品线性关系实验 2.6 重复性实验取五柴颗粒6份，分别制成供试品溶液，按样品测定方法测定，结果五味子甲素平均含量为0.313 mg/ml，即五柴颗粒中五味子甲素含量为3.13 mg/g，RSD%为3.939 96。结果见表2。表2 重复性实验 2.7 加样回收率实验取上述测定完含量的五柴颗粒0.5g，配制成10 ml的溶液，取1 ml分别与3，4，5，6标准液1 ml混合，制成供试液，按上述色谱条件测定含量，并 计算 回收率。结果见表3。 2.8 血清五味子甲素浓度经时变化小鼠灌胃五柴颗粒溶液后，血清成分谱见图2，通过与五柴颗粒及空白血清对比分析，并经标准对照品确认，血清中可检测到五味子甲素；各个时间段的血清样品按同标准品同样的方法进样，根据各样品的图谱所对应的峰面积以及标准曲线，计算出各样品的血清五味子甲素的浓度（见表4），绘制浓度-时间曲线（见图4），可见五味子甲素在本次研究中先出现浓度随着时间延长而上升，说明在该段时间内五味子甲素虽然在代谢，但是其吸收量大于代谢量；而当达到一定时间时，其吸收量不足以补充代谢量，出现其含量的下降。 3 讨 论 为了阐明五柴颗粒中五味子甲素在体内的药物动力学 规律 ，对五柴颗粒体内外成分进行了分析，结果表明五柴颗粒中主要药物为五味子，且吸收进入血液的主要成分以五味子甲素为主。在本次实验中有两点需要注意：①由于五柴颗粒溶解度低，且五柴颗粒中五味