植物组织石蜡切片.pdf

植物组织石蜡切片的制作 BIOX.CN 2005-5-25 14:04:43 来源：生命经纬 一、实验目的 1．熟练掌握石蜡切片的方法。 2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。 3．学会植物内部结构的比较研究方法。 二、实验器具与试剂 1．器具 石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片 等。 2．试剂 10%番红水溶液、0.5%固绿（用 95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、 蒸馏水、甘油、中性树胶等。 三、实验材料 幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。 四、实验内容与方法 石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片 机切片，可以切出很薄的切片。凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。全都过程如下： 1．固定 2．洗涤 3．脱水与硬化 4．脱酒精 2．封埋 6．切片 7．粘片 8．脱蜡 9．染色 10．脱水 11. 透明 12．胶封 （一）固定 1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保 持原来的结构以供我们观察。良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固； 不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。 2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为： (1) 简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。常用的简单固定液有： A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或 95％酒精。酒精穿透力强，固定时间常在 1 小时以 内。高浓度酒精有使材料收缩的作用。70％的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普通酒精 即 95％的酒精，绝不可用纯酒精。酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。 酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。 B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。固定用的浓度为 4-10％ 甲醛也是强还原剂。不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩， 但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。所以甲醛一般不单独作固定，而与其他液体混合 使用。 C．醋酸：为无色透明的液体，刺激性极强，冷则凝结成冰，故又叫冰醋酸。醋酸以与水和酒精配 成各种比例的溶液，所用浓度为 0.2～5％，也常与其他固定剂配合使用。醋酸穿透性很强，单独 使用，有使原生质膨胀的作用，故常与酒精，甲醛等合用，醋酸为固定染色体的优良固定液，因 此固定染色体的固定液中，几乎都含有醋酸。 (2) 混合固定液：由几种药剂，适量配制而成。常用的有下列几种： A、F.A.A 固定液(又称万能固定液)： [用途]这个固定液在植物研究上，应用最多，为植物组织最常用的固定液。固定时间，不受限制， 短为 24 小时，长可延至数月或数年。野外工作，非常便利。并且固定的材料，不妨碍染色，但对 染色体的固定不佳。材料固定后，用 50％酒精洗涤数次。 [配法] 50％或 70％酒精 90 毫升 冰醋酸 5 毫升 福尔马林 5 毫升 柔软材料用 50％酒精，坚硬材料用 70％酒精配制。 B、卡尔诺氏(Carnoys)固定液 [用途]此液作组织细胞的固定，有极快的渗透力，固定根尖和花药只需 40-60 分钟。固定后用 95％ 酒精冲洗，在组织不能立即处理时，需转入 70％酒精中保存。配法有两种： C．纳瓦兴(Navaschjns)固定液 [用途]此液在植物制片上应用甚广，是细胞学及组织学上一种优良的固定液。此液原来的配方已 很少应用，现所用的都是改良液，且种类很多，如材料较柔嫩，含水量较多，可用配方 I、Ⅱ； 材料较坚硬，含水量较少，可用Ⅳ、V 配方，其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适用。为了使用 方便，常分别配成甲、乙两种基液，用时临时等量配合。固定时间为 12-24 小时，固定后用 70％ 酒精洗涤数次。 (二)洗涤 材料固定后，药剂继续留在组织中，易使组织破坏，必须用水或酒精洗去。用什么去洗，可根据 三条原则： 1．凡用水溶液配制的固定液，特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液，一律用水洗。 2．凡用酒精配制的固定液，一律用同浓度的酒清洗。 3．如固定液中含有苦味酸．在 70％酒清中停留稍久时，可除去黄色。如用升汞固定的材料，在 洗涤时，须加碘液，可除去汞的结晶。 （三）脱水与硬化 材料洗涤后，其中含水，水与石蜡不能混合，必须洗去。去水用酒精，材料由水入酒精中，不能 操之过急，须由低度酒