制药工艺9.doc

第九章 亲和纯化技术 一、填空题 、亲和层析中非专一性吸附有、、。 、亲和过滤指的是将和结合运用，它包括和两大方法。 二、选择题 1、下面关于亲和层析载体的说法错误的是 （） A载体必须能充分功能化。 B载体必须有较好的理化稳定性和生物亲和性，尽量减少非专一性吸附。 C载体必须具有高度的水不溶性和亲水性。 D理想的亲和层析载体外观上应为大小均匀的刚性小球。 2、制备亲和柱时，应首先选用的配基是 （） A大分子的 B小分子的 C中等大小的 D不确定 、亲和层析的洗脱过程中，在流动相中减去配基的洗脱方法称作（ A. 阴性洗脱 B. 剧烈洗脱 C. 正洗脱 D. 负洗脱三、名词解释 1、（Affinity-based resersed micellar extraction）（secondary-effect affinity precipitation）亲和萃取： 6、负洗脱： 四、问答题 1、亲和层析的原理是什么？主要特点是什么？ 进行说明。设 KL=10-7，求[L0] （6分） 3、何谓“手臂”？其长短与亲和层析效果有何联系？为什么？ 4、从亲和沉淀的机理和分离操作的角度出发，简述亲和沉淀纯化技术的优点。 一、填空题 、亲和层析中非专一性吸附有离子效应、疏水基团、复合亲和力。 、亲和过滤指的是将亲和层析和膜过滤技术结合运用，它包括亲和错流过滤和亲和膜分离两大方法。 二、选择题 1、下面关于亲和层析载体的说法错误的是 （ B ） A载体必须能充分功能化。 B载体必须有较好的理化稳定性和生物亲和性，尽量减少非专一性吸附。 C载体必须具有高度的水不溶性和亲水性。 D理想的亲和层析载体外观上应为大小均匀的刚性小球。 2、制备亲和柱时，应首先选用的配基是 （ A ） A大分子的 B小分子的 C中等大小的 D不确定 、亲和层析的洗脱过程中，在流动相中减去配基的洗脱方法称作（ A. 阴性洗脱 B. 剧烈洗脱 C. 正洗脱 D. 负洗脱三、名词解释 1、（Affinity-based resersed micellar extraction）（secondary-effect affinity precipitation）pH、离子强度、温度和添加金属离子等）改变时溶解度下降、发生可逆性沉淀的水溶性聚合物为载体固定亲和配基，制备亲和沉淀介质。亲和介质结合目标分子后，通过改变物理场使介质与目标分子共同沉淀的方法成为二次作用亲和沉淀。 4、亲和萃取：利用聚乙二醇（PEG）/葡聚糖（Dx）或聚乙二醇/无机盐等双水相系统萃取分离蛋白质等大生物分子，特别是胞内酶的双水相萃取法。利用偶联亲和配基的PEG为成相聚合物进行目标产物的双水相萃取，可在亲和配基的亲和结合作用下促进目标产物在PEG相（上相）的分配，提高目标产物的分配系数和选择性。 由载体及配基偶联构成，在亲和层析中起可逆结合的特异性物质称为配基（Ligand），与配基结合的层析介质称为载体（Matrix）。 6、负洗脱：在双底物反应中，与配基互补的酶的亲和吸附，如果吸附取决于A物的存在与否，则洗脱液中除去A物时，吸附在配基上的互补分子也会洗脱下来，这种洗脱方法也称负洗脱。 四、问答题 1、亲和层析的原理是什么？主要特点是什么？ 答：亲和层析的设计和过程大致分为以下三步：1）配基固定化：选择合适的配基与不溶性的支撑载体偶链，或共价结合成具有特异亲和性的分离介质；2）吸附样品：亲和层析介质选择性吸附酶或其他生物活性物质，杂质与层析介质间没有亲和作用，故不能被吸附而被洗涤去除；3）样品解析：选择适宜的条件使被吸附的亲和介质上的酶或其他生物活性物质解析下柱。 亲和层析技术的最大优点在于，利用它从提取液中经过一次简单的处理便可得到所需的高纯度活性物质。此外亲和层析还有对设备要求不高、操作简便、适用范围广、特异性强、分离速度快、分离效果好、分离条件温和等优点：其主要缺点是亲和吸附剂通用性较差，故要分离一种物质差不多都得重新制备专用的吸附剂。另外由于洗脱条件较苛刻，须很好地控制洗脱条件，以避免生物活性物质的变性失活。 进行说明。设 KL=10-7，求[L0] （6分） Ve为洗脱体积（1分）； V0固定相（柱床）体积（1分）； [L0]为固定化配基浓度（1分）； KL为亲和对解离常数（亲和势）（1分）； 只有当阻留值≥10时，亲和层