库尔勒香梨树腐烂病生物防治方法的探究.docVIP

库尔勒香梨树腐烂病生物防治方法的探究 吴娜 王菁 高永强 耿涛 (指导教师) 武策 李昂 雷雨（高二21班、22班） （新疆库尔勒市农二师华山中学高中部 841000） 1 课题提出的背景 库尔勒香梨因其具有一种独特的香味、皮薄肉细、酥脆爽口、耐贮藏、营养丰富等特点而驰名中外，远销北京、上海、新加坡、泰国、马来西亚等地区，是我区出口创汇的主要果产品。但是，近年来腐烂病成了我区香梨树的的头号杀手，这是导致香梨树死亡的致命病害。目前，在我区90%以上的香梨树死亡都是由该病引起，当枝干染病后, 轻者树势变弱、生长缓慢、产量和品质下降, 重者枝干枯死, 甚至整株死亡,甚至出现毁园惨状，严重影响香梨的产量和品质，给果农和我区带来极大的经济损失。 后来，我们就成立了“香梨树救援队”研究性学习小组，通过采访果农、林科所专家及查阅文献，我们得知香梨树腐烂病的致病菌是真菌, 属半知菌亚门球壳孢目壳襄孢属, 是一种弱寄生性的伤口侵入菌，当病菌孢子落到适于生长的场所, 便萌发菌丝从伤口侵入并在树体已死亡的组织中生长定殖下来, 然后分泌毒素杀死周围细胞, 之后再进一步扩展到这些被杀死的细胞和组织中, 不断扩大为害, 造成皮层腐烂。通过采访果农、药店售货员及林科所专家我们得知目前腐烂病的主要防治方法是喷洒抗生素、抑菌剂等，我们可以看到这些药剂大多都具有毒性，果农叔叔都需要带厚手套，但难免会通过呼吸系统对果农叔叔的身体产生伤害，甚至还有中毒的现象出现。同时，喷洒的大部分是杀菌剂，这实质上会加快抗药病原菌的筛选，培养出“超级病原菌”。此外，喷洒农药还有可能造成香梨毒性残留，这成为降低我区香梨出口率的主要因素。 2 课题研究目的 我研究小组期望能够寻找到一种具有高效、无毒、与环境兼容、和谐的生物防治方法，减少甚至替代传统的广谱、高毒有机化学农药。 通过阅读大量的文献资料，我们得知（1）香梨腐烂病的致病菌是真菌。（2）大量的芳香植物挥发油具有一定的抑菌杀菌效果。那么我们假设新疆地产的两种芳香植物-薰衣草、薄荷及废物再利用桔皮的挥发油对库尔勒香梨树腐烂病病原菌具有一定的抑菌效果。于是设计实验探究不同种类、不同浓度的挥发油对香梨树腐烂病病原菌的抑菌效果。若假设成立，该生物防治方法具有农药无法比拟的优势：（1）天然绿色、无污染（2）无需提取、直接利用——将芳香植物种植于梨树下，芳香植物可源源不断的挥发出药用成分-挥发油。（3）附加功效—— 香梨采收后需要保鲜、防腐，而树下挥发到香梨表面的挥发油可作为香梨的天然防腐剂，延长保鲜期。（4）附加收入——香梨树下的芳香植物可以作为副产品获取收入。 3 课题研究过程及结果 3.1 提取3种芳香植物的挥发油 3.1.1 实验步骤 称取薰衣草花（薄荷叶、桔皮）30g→置于圆底烧瓶中→加水600ml→连接挥发油测定器与回流冷凝管自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止缓缓加热至沸至测定器中油量不再增加薰衣草干花、薄荷干草、桔皮挥发油的提取率分别为8.75%，4.6%，3.33%。 3.2 香梨树腐烂病病原菌的培养及生物学性状的观察 3.2.1 实验步骤 配置PDA培养基→灭菌→倒平板→三点接种法接种→观察性状 3.2.2 实验结果 香梨树腐烂病病原菌在PDA培养基上形成羽毛状的菌落。菌落乳白色，质地柔韧，结构致密。显微镜下观察，具有白色气生菌丝。 3.3 三种挥发油对香梨树腐烂病病原菌的抑菌效果 3.3.1 实验步骤 (1) 配置不同浓度的精油 分别吸取薰衣草（桔皮、薄荷）精油0、25、50、75、100、 125、150μL精油，按照精油与吐温1: 6配比（吐温分别为450、150、300、450、600、750、900μL）配置精油乳化液，装于EP管中，标号（X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7） (2) 制备加药培养基 将EP管中的精油依次加入装50ml培养基中，使精油在培养基中的体积分数分别为0，0.5，1.0，1.5，2.0 ，2.5，3.0 μL/mL。将50mL培养基均匀倒入3个培养皿（标记为X1、X1、X1）。 (3) 菌柄的制备及添加 取PDA 培养基上菌丝均匀布满培养基表面的供试菌种， 用直径为5 mm 的无菌打孔器在菌落边缘切取菌饼， 用无菌镊子取菌饼， 用无菌镊子将菌饼接种至冷却后的处理组和对照组培养基中，每个培养皿接种菌饼1 块。 (4) 培养 置于27 ℃的生化培养箱内培养，直到对照组菌落长满培养皿为止。 (5) 实验数据记录 每隔24 h 用十字交叉法测量菌落直径。计算精油含量对真菌的相对抑制率：抑制率/%=100×（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径-菌饼直径 3.3.2 实验现象 实验现象如下所示。