酶工程期中思考题参.docVIP

1. 举例说明酶催化的绝对专一性和相对专一性。 绝对专一性具有绝对专一性的酶仅作用于一种底物，催化一种反应。例如脲酶只能催化脲（又称尿素）水解成氨和二氧化碳，而对尿素的氯或甲基取代物都无作用。相对专一性有些酶的专一性较低，它们能作用于一类化合物或一类化学键。这种专一性称为相对专一性。其又可分为族类专一性（或称基团专一性）和键专一性，前者对底物化学键两端的基团有要求。例如α-D-葡糖苷酶作用于α-糖苷键，并要求α-糖苷键的一端必须有葡糖基团。因此，它可催化蔗糖和麦芽糖水解。键专一性只作用于一定的化学键，而对键两端的基团无严格要求，如酯酶可使任何酯键水解。 1.酶的产量高:通过筛选获得高产菌株，妥善保存并定期复壮 2.容易培养和管理:对培养基成分和工艺条件没有苛刻的要求，适应能力强 3.产酶稳定性好:能稳定生长并表达所需的酶，菌种不易退化 4.有利于酶的分离纯化:酶的分离提纯要比较容易，能获得较高纯度 5.安全可靠:菌种对环境及对操作人员安全，不产生不良影响 第二版：P22-P25 第三版：P20-P22 3. 固定化细胞发酵产酶具有哪些特点？ 固定化细胞发酵产酶的特点有： 1.提高酶的产率 ： 细胞固定化滞后，单位空间内细胞密度增大，因此加速了生化反应； 2.可以反复使用，可以在高稀释率下连续发酵； 3.提高基因工程菌质粒的稳定性； 4.固定化细胞对pH值、温度等外界条件的适应范围增宽，对抑制剂的耐受能力增强，因此发酵稳定性好； 5.可先经预培养再转入发酵生产，缩短发酵周期，提高设备利用率 6.固定化发酵是非均相体系，产品容易分离纯化 7.一般只适用于胞外酶的生产 第二版：P68-P70 第三版：P57-P58 4. 概述酶生物合成模式及每种模式的生物学特征，并写出产酶动力学方程并根据酶生物合成模式讨论之。 根据酶产生与细胞生长的关系酶的生物合成模式可分为4类： ⑴同步合成型 ①酶的生物合成与细胞生长同步进行（生长偶联型） ②大部分组成酶属于此类 ③此类酶的合成可由其诱导物诱导生成，不受分解代谢物阻遏和反馈阻遏作用 ④酶对应的 mRNA 很不稳定 典型例子：米曲霉培养生产单宁酶 [EC 3.1.1.20]（书p36 图2-8） ⑵ 延续合成型 ①酶的合成伴随着细胞的生长而开始，生长进入平衡期后，酶还能延续合成一段时间 ②此类酶的合成可被诱导物所诱导，一般不受分解代谢物阻遏 ③此类酶所对应的 mRNA 稳定性好 举例：黑曲霉培养生产聚半乳糖醛酸酶 [EC 3.2.1.15]（书p37 图2-9） ⑶中期合成型 ①酶的合成在细胞生长一段时间后才开始，当细胞生长进入平衡期后，酶的合成随之停止 ②酶的合成受到产物的反馈阻遏作用或分解代谢物阻遏作用 ③酶所对应的 mRNA 稳定性较差 举例：枯草杆菌碱性磷酸酶 [EC 3.1.3.1] 受其水解产物磷酸的反馈阻遏作用（书p38 图2-10） ⑷滞后合成型 ①当细胞生长一段时间或进入平衡期后，才开始合成并大量积累酶 ②许多水解酶属于此类 ③阻遏物的存在延缓了酶的合成 ④此类酶的 mRNA 稳定性好 举例：黑曲霉酸性蛋白酶 [EC 3.4.23.6] （书p38 图2-11） 4种模式对应的酶合成曲线如下图所示： 产酶动力学方程为： 各种产酶模式下的宏观动力学方程 ⑴同步合成型：( = 0，则 ⑵ 中期合成型：特殊的生长偶联型， ( = 0 有阻遏存在时，( =0，无酶产生 阻遏解除后才开始合成酶，此时 ⑶滞后合成型：非生长偶联型，( = 0，则 ⑷延续合成型：部分生长偶联型，( ( 0，( ( 0 第二版：P60-P64,P66-P67 第三版：P35-P39，P54-P55 5. 以大蒜细胞培养生产SOD为例，简述植物细胞培养产酶的工艺过程。 大蒜细胞培养产 SOD过程如下： 大蒜愈伤组织的诱导 选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，去除外皮 先用70% 乙醇消毒 20 s，再用0.1%升汞消毒 10 min，然后无菌水漂洗3次 在无菌条件下，切成0.5 cm3 的小块，植入含有3 mg/L 2,4-D和1.2 mg/L 6-BA 的半固体 MS 培养基中 25 oC，600 lux，12 h/d光照条件下培养18天，诱导得到愈伤组织，每18天继代一次 大蒜细胞悬浮培养 将上述在半固体 MS 培养基上培养18天的愈伤组织，在无菌条件下转入含有3 mg/L 2,4-D 和 1.2 mg/L 6-BA 的液体 MS 培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25 oC，600 lux，12 h/d光照条件下振荡培养10～12天，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞 无菌条件下，经过筛网将小细胞团或单细胞转入含有3 mg/L 2,4-D和1.2 mg/L 6-BA 的液体 MS 培