实验六：细胞凋亡的形态和生化特征观察.pptVIP

实验九：细胞凋亡的形态和生化特征观察 实验目的 1.掌握细胞凋亡的形态特征。 2.学会根据染色质的凝聚程度,是否形成凋亡小体和细胞膜通透性变化,鉴别凋亡细胞,坏死细胞及正常细胞。 实验原理 细胞死亡分为2种类型:程序性细胞死亡或称细胞凋亡。凋亡细胞的膜保持完整性,但染色质高度凝聚,有些凝聚块附着于核膜上,使细胞和核的外形发生改变,并产生出大小不同被膜包围的凋亡小体;正常细胞的膜保持完整,且染色质较均匀分布;坏死细胞的膜损伤,染色质凝聚程度远低于凋亡细胞。 仪器、材料和试剂 （一）仪器荧光显微镜,CO2培养箱冰箱,超净工作台,倒置显微镜和离心机等。 （二）材料 体外培养细胞,微量加样器(1 μL-1mL),0。5mL和1。5mL的微量离心管,20 μL。200 μL和1mL吸头,10mL培养瓶,载玻片,盖玻片等。 （三）试剂 HT浓度为1mg/mL的针剂;荧光探针;用PBS(pH7。4)将PI配成500ug/mL的储液,用蒸馏水将Ho。33342配成1mg/mL的储液,2种储液都在-20℃冻存。 实验步骤 1.在超净工作台中进行无菌操作。 实验前约24h,接种3瓶培养细胞,每瓶含6mL培养基。在37℃,5％CO2培养箱中培养。 2.当细胞密度达70-80％时(对数生长期),每瓶约有106个细胞。用无菌离心管离心(1000r/min,5min)收集细胞,弃上清,分别用6mL培养基重悬