何水林版基因工程第五章__基因的转移与重组体的筛选和鉴定.pptVIP

?-半乳糖苷酶使X-gal分解成蓝色产物。 * 利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择。 转化进来的外源基因产物能够弥补受体菌株的突变型缺陷。 二、根据插入基因的表型选择 1. 弥补缺陷 his- his+ 受体菌： 外源基因： 在不含组氨酸的培养基中生长 * 例：抗生素抗性 抗性基因 载体 外源DNA 连接 转化 受体菌 抗生素培养基平板 含抗生素抗性基因的 克隆才能生长 使被转化的受体菌表现出外源基因的表型。 2. 增加新性状 * 有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。 1. 直接电泳检测法 从转化后的菌体克隆中分离质粒，电泳、比较其分子量。 三、 DNA电泳检测法 Marker 载体 重组克隆 * 2. 酶切电泳筛选法 根据外源DNA序列的限制性酶切图谱，选一两种内切酶切割，电泳后比较电泳结果：DNA带数和长度。 一般用重组时的内切酶将外源DNA切出 单 双 * * 四、PCR扩增检测法 应用PCR反应扩增出预期DNA片断 （1）从重组克隆中提取质粒（或DNA）； （2）用外源DNA插入片断引物作PCR； （3）凝胶电泳； （4）是否有条带产生，条带大小是否正确。 * 五、核酸杂交检测法 1. Southern blotting 从宿主细胞中提取DNA，用探针杂交。 * 2. Northern blotting 主要检测插入片断是否被转录。 从宿主细