2015—2016学年人教版选修一酵母细胞的固定化课件（19张）.ppt

课题3 酵母细胞的固定化 通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活； 酶制剂存在的缺陷 溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 反应后会混在产物中，可能影响产品质量。 一、固定化酶的应用实例 固定化酶技术的优点：使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；固定在载体上的酶可以被反复利用。 在生产实际中使用固定化酶技术有无不足?如有不足,怎么办? 有，一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能进行，所以操作比较麻烦。 二、固定化技术 利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间的技术。 1.将酶或细胞固定化的方法 将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互连接起来 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 包埋法 化学结合法 吸附法 2.酶和细胞固定方法的选择 ①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定 ②细胞适合采用包埋法固定 （1）、方法 （2）、原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或结合,而个小的酶容易从包埋的材料中漏出 3、固定化细胞常用的载体 常用的载体为不溶于水的多孔性载体，有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等。 三、实验操作 （一）制备固定化酵母细胞 阅读P50~51思考下列问题： （1）制备过程包括哪几个步骤？ （2）你认为哪个步骤的操作是最重要的一环？ 1、酵母细胞的活化 活化：让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态 2、配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液 称取无水CaCl2 0.83g。放入200mL的烧杯中，加入150mL的蒸馏水，使其充分溶解，待用。 称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中.加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止 3、配制海藻酸钠溶液 加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环，涉及到实验的成败，一定要按照教材的提示进行操作。海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。 应当注意什么问题？ 4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。 5、固定化酵母细胞 以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30 min左右。 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。 这一阶段成功与否呢？怎样评价？ 观察凝胶珠的颜色和形状: 如果制作的凝胶珠颜色过浅，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 （二）用固定化细胞发酵 1、将固定好的酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。 2、 将150mL质量分数为10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于25℃下发酵24h。 这一阶段成功与否呢？怎样评价？ 观察发酵的葡萄糖溶液； 利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味。 类型 优点 不足 直接使用酶 催化效率高，低耗能、低污染等。 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。 固定化酶 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，固定在载体上的酶可被反复利用 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的。 固定化细胞 成本低，操作更容易 固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降等