2016-2017学年人教版必修一叶绿体色素的提取和分离教案.doc

实验八 叶绿体中色素的提取和分离 一．实验原理： 色素提取原理： 利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有机溶剂中，形成色素液。 色素分离原理： 由于四种色素在层析液的溶解度不同，因而四种色素在滤纸上的扩散速度也不同，从而将它们分离开来。 二．实验材料： 新鲜的绿色叶片、干燥的定性滤纸、烧杯、研砵、玻璃漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培养皿盖、药勺、量筒、天平。 药品：丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙。 三．实验过程： （一）。制备色素滤液： 1．取叶：[来源:学科网]二氧化硅：为了使研磨充分； 碳 酸钙：保护色素免受破坏； 丙 酮：作为色素的溶剂。 思考题： 研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少层膜？ 提示：应该是3层，一层细胞膜，两层叶绿体膜。 碳酸钙保护色素的原理是什么？ 因为叶绿素极易分解，在研磨过程中，细胞结构被破坏，细胞液中的有机酸释放出来，很容易破坏叶绿素分子，为了缓冲研磨液中的PH值一，可以加入碳酸钙，来中和释放出来的有机酸，从而避免了叶绿素被破坏。 B．充分迅速地研磨； 充分是为了彻底破坏细胞结构，迅速是为了防止丙酮挥发； 防止挥发采取的措施： 在研砵上加一个中间有洞的纸，把玻璃棒插在中间研磨可以减少挥发。 3．取滤液： 在一支试管上插入一个小漏斗，中间用脱脂棉或者尼龙布作为过滤用，迅速倒入研磨滤液，进行过滤，然后在试管口用棉花塞紧。 思考题： 为什么要迅速倒入？为什么要用棉花塞紧试管管口？ 同样为了防止丙酮挥发； 同时由于色素极容易被光和空气所破坏，所以要避光和隔绝空气保存。 （二）制备滤纸条： 1。干燥处理过的定性滤纸； 为何干燥处理？ 有利于层析液在滤纸上的扩散； 2．规格： 6㎝×1㎝ 3．处理： 在滤纸的一端，剪去两角，大约距1㎝处，角度约45°； 剪角的目的是什么？ 因为在靠近两侧的层析液扩散的速度比较快，剪去两角后，扩大了两侧层析液扩散的距离，可以调整层析液扩散处于同一平面。 (4). 距1㎝处用铅笔画一条细线； 作为将来画滤液细线的标记； 不能用有机墨水笔来画，因为墨水会溶解于层析液中，而且有机墨水也会在滤纸上扩散。 （三）画滤液细线： 用毛细吸管吸取色素滤液，沿铅笔细线处画滤液细线； 用力要均匀，细线要细、齐、直； 因为如果不细、齐，将来层析时会导致色素带的重叠； 待滤液干后，再重复画二到三次； 是为了增加滤液细线上色素的量，实验效果明显。 （四）纸层析： 1。层析液的量： 大约是3ml， 原则：烧杯中层析液的深度不得超过滤纸条上的滤液细线； 2．插入滤纸条： 有滤液细线的一端朝下，略微斜靠着烧杯内壁，轻轻地插入层析液中。 注意： 不能让滤纸条上的滤液细线触及到层析液; 因为，色素同样可以溶解到层析液中； 用培养皿盖盖住烧杯口； 为了防止层析液中的丙酮、苯等有毒物质挥发出来。 使烧杯中的层析液蒸气处于饱和状态，有利于层析液的扩散。 （五）观察结果： 一般是从上到下来进行观察比较色素带，主要从以下几个方面，颜色、溶解度、分子式、扩散速度、含量等。 [来源:Z+xx+k.Com]a 叶 绿 素b 颜 色 橙黄色 黄色 蓝绿色 黄绿色 溶 解 度 最大 较大 大 较小 分 子 式 C40H56 C40H56O2 C55H72O5N4Mg C55H72O6N4Mg 含 量 最少 较少 最多 多 相邻间距离 叶黄素———— 叶绿素a ———— 叶绿素b 最大 最小 分 子 量[来源:Z.xx.k.Com][来源:Zxxk.Com][来源:Zxxk.Com]