吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究.docVIP

　　吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究 作者：王婷，滕达，陈复兴，陶征中，吕小婷，李佚，张颂，刘军权 【摘要】 目的 探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法 按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康(分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mmol/L)诱导，24 h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素12(IL-12)检测，沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果 吡罗昔康浓度为0.04 mmol/L时诱导的γδT细胞穿孔素和粒酶B分别为78.7 %和71.8%，明显高于对照组(分别为51.4%和60.9%)。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达，并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24 h后，培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌，并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04 mmol/L时最高(75%)，明显高于对照组(58%)。结论 经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。 【关键词】 γδT细胞;吡罗昔康;穿孔素;粒酶B;NKG2D;γ-干扰素;α-肿瘤坏死因子;白细胞介素12;胃癌 　　Abstract: Objective To explore the effect of piroxicam in enhancing the cytotoxicity of human γδT cells to gastric cancer cells. Methods γδT cells at different concentrations (0.01 mmol· L-1, 0.02 mmol· L-1, 0.04 mmol· L-1, 0.08 mmol· L-1 and 0.16 mmol· L-1, respectively). 24 h later, the supernatants ents ount of perforin, granzyme B and NKG2D by floetry (FCM) as e B (78.7 % and 71.8%, respectively) of γδT cells at the concentration of 0.04 mmol· L-1 arkably inhibited by piroxicam in a positive correlation ounts of IFN-γ and IL-12 secreted by γδT cells of piroxicam induction for 24 h had no significant difference in contrast to the control group, hoanner. The cytotoxicity of γδT cells to the gastric cancer cell line BCG-823 (75%) -induced γδT cells to gastric cancer cell line BCG-823 arkedly enhanced, the mechanism of ight be related to the higher levels of perforin and granzyme B expressed in γδT cells. 　　Key ; perforin; granzyme B; NKG2D; IFN-γ; TNF-α; IL-12; gastric cancer 　　胃癌是消化道最常见恶性肿瘤之一,在我国的发病率和死亡率居各种恶性肿瘤首位，超过2/3确诊胃癌的患者不可手术切除,即使可行手术切除其复发率也很高[1]。因此，胃癌的预防和早期 治疗 尤为重要。流行病学调查发现，吡罗昔康和其他非甾体类抗炎药一样，长期服用能减少和预防消化道肿瘤的发生[2]，体外试验证明，吡罗昔康能提高人γδT细胞杀伤胃癌细胞的活性[3]。γδT细胞是广泛分布于消化系统、呼吸系统等黏膜和上皮组织内的固有免疫T细胞，具有抗原提呈、杀伤肿瘤和免疫调节作用[4-5]。为此，我们试用不同浓度的吡罗昔康在体外诱导人γδT细胞，观察吡罗昔康对人γδT细胞的穿孔素(perforin)、粒酶B(Gran B)、NKG2D和分泌γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1